三氧化二砷联合粉防己碱对乳腺癌微环境及肺转移的影响

From the theory of Chinese Medicine,"phlegm-toxin flowing and pouring" is one core pathogenesis of breast cancer recurrence of the transfer of the etiology. Based on the previous studies have found that the best dosage of arsenic trioxide and tetrandrine.This study will through in vitro experiments expression were high VEGF pulmonary metastasis cell lines, in BALB/c nude mice to establish a reliable and groups of transplantation model, and arsenic Trioxide and Tetrandrine to intervene, through the RT-PCR, the Western Blot analysis on traditional Chinese medicine to tumor microenvironment and the relevant factor expression changes, so as to prove from VEGF- Akt/NF-κB signal pathway control tumor angiogenesis and tumor cell apoptosis, for the synergistic effect of arsenic trioxide and tetrandrine .For "expectorative detoxification" method and he Synergistic Effect of Arsenic Trioxide and Tetrandrine used in the clinical treatment of breast cancer has provide further theoretical innovation and experimental basis.

中医理论认为"痰毒流注"是乳腺癌复发转移的关键性病因病机。本课题组前期研究成果发现"祛痰解毒"的中药组分三氧化二砷（As2O3）与粉防己碱(Tet)联合用药治疗乳腺癌具有明显的协同作用,并确立了固定的联用比例。本研究将As2O3与Tet作用于不同特性的乳腺癌细胞株，探索其促凋亡作用及机制；从中筛选出VEGF高表达的人乳腺癌细胞株，在BALB/c裸鼠上建立可靠的群体移植瘤模型，以As2O3、Tet、As2O3联合Tet进行干预，观察对乳腺癌新生血管和肺转移的干预作用。又通过RT-PCR、Western Blot等方法分析药物对肿瘤微环境中各相关因子表达的影响及通过VEGF- Akt/NF-κB信号通路对肿瘤新血管生成的调控机制，为"祛痰解毒"法治疗乳腺癌提供理论创新及As2O3联合Tet用于乳腺癌临床治疗提供基础研究。

本课题在既往研究基础上，分析三氧化二砷、粉防己碱及两药联合对MCF-7、MDA-MB-435S细胞和HCC1937细胞体外的增殖抑制作用及促凋亡相关机制。体内实验则利用MDA-MB-435S细胞接种的裸鼠乳腺癌肺转移模型来观察亚砷酸注射液、汉防己甲素注射液及两药联合与化疗药顺铂的抑瘤作用及其与肿瘤血管生成相关指标的表达，同时检测各组裸鼠肝肾功能以判断毒性中药安全性。以期为中医“以毒攻毒”指导下的中药配伍组合治疗乳腺癌及乳腺癌肺转移提供相关实验依据。 . 三氧化二砷、粉防己碱及两药联合对MCF-7、MDA-MB-435S及HCC1937乳腺癌细胞的体外生长均有较为显著的抑制效果，抑制率随作用时间的延长及药物浓度增加上升，存在明显量效、时效关系。在粉防己碱 (1μg/mL) 和三氧化二砷 (1.5μg/mL)时协同作用最好。三氧化二砷、粉防己碱及两药联合均可使细胞形态发生改变，且合药效果优于单药。三氧化二砷、粉防己碱及两药联合干预三种乳腺癌细胞48h小时早期凋亡率和晚期凋亡率均有上升，且合药较之单药细胞凋亡率增加。经三氧化二砷联合粉防己碱干预48小时后，MDA-MB-435S及HCC1937细胞中Caspase-3、bax、bid相关基因表达随药物浓度变化升高，Bcl-2、suivivin调控基因的表达降低。且粉防己碱与三氧化二砷联合用药效果，优于等浓度的单一用药效果。MDA-MB-435S及HCC1937细胞经药物作用后Caspase-3 前体表达量减少，反之切割体表达量增加。下游PRAP的酶切条带提示细胞凋亡的发生。Bcl-2表达降低，Bax、Bid表达增加，且合药作用优于等浓度单药。Survivin的表达在两药单独作用时与空白组无明显差异，合药则在该蛋白的表达上降低明显。体内试验为接种MDA-MB-435S细胞的裸鼠肺转移模型，造模成功，实验表明汉防己甲素注射液、亚砷酸注射液及两药联合均可减慢肿瘤生长，抑制肺转移发生，但较之顺铂则效果略差。两药单用及合用均对裸鼠肝肾功能损害无明显差异。对裸鼠瘤体及肺组织研究发现，汉防己甲素注射液、亚砷酸注射液及两药联合均可降低血管生成相关指标的表达，且合药组比单药组表达更低。