基于TGFβ1、PDGF、ERK、MMPs 与TIMPs靶点的蒙古山萝卜酸抗肝纤维化机理研究

Scabiosa comosa Fisch is plant medicine of traditional Mongolian medicine for liver disease with jaundice hepatitis, hepatic emaciation and hepatic fever。The Mongolia Scabiosa Acid （MSA）of chromatographic separation prevented liver injury and fibrosis of BCG LPS and carbon tetrachloride induced in rats，inhibited hepatic stellate cell proliferation and hastening their death in vitro. In carbon tetrachloride rat liver injury animal model, Detection of MSA intervention be observed: ①in process of hepatic fibrosis cell morphological changes characteristic, Changes of hepatic fibrosis and HSCs apoptosis and ultrastructure of collagen network architecture; ②immunohistochemistry observation of liver TGF beta 1, PDGF, ERK, MMPs and TIMPs expression and distribution characteristics; ③ELISA method of dynamic measurement of serum PC - III, C - IVand HA, type LN collagen changes;④ in vitro assay for the detection of HSCs TGF beta 1, PDGF mRNA and ERK, MMPs, TIMPs expression; ⑤analysis of MSA regulation of liver fibrosis target ,can be further for MSA application development of liver fibrosis, and to provide the experimental basis and research method.

蒙古山萝卜为蒙医治疗肝病的植物药，用于肝性消瘦、肝性发热和黄疸性肝炎。经层析分离的蒙古山萝卜酸（Mongolia Scabiosa Acid MSA）具有预防卡介苗脂多糖与四氯化碳诱发的肝损伤与纤维化，显著抑制HSCs的增值和加速其死亡，而潜在的不影响其它细胞。以大鼠四氯化碳肝损伤纤维化模型， MSA干预下观察：①肝纤维化形成过程中细胞形态学变化特征、肝纤维化的变化情况、HSCs凋亡及胶原网络构筑等超微结构；②免疫组化法观察肝组织TGFβ1、PDGF、ERK、MMPs 与TIMPs的表达与分布特点；③ELISA法动态测定血清PC-Ⅲ、C-Ⅳ和HA、LN型胶原变化情况；④检测HSCs的TGFβ1、PDGF mRNA及ERK、MMPs 、TIMPs的表达；⑤分析MSA调控肝纤维化作用靶点，为MSA进一步应用、开发及肝纤维化防治提供实验依据与研究思路。

蒙古山萝卜酸（MSA）是从蒙医药治疗肝病的常用药材蒙古山萝卜中提取的有效部位。药材用于肝热症、肝中毒、肝性消瘦、黄疸性肝。之前药理研究，蒙古山萝卜注射液临床用于各类发热病。该注射液可提高小鼠血清溶菌酶、巨噬细胞溶菌酶、巨噬细胞酸性磷酸酶和巨噬细胞杀伤李斯特杆菌的活性；降低大肠杆菌内毒素的毒力；有解热、消炎作用；降低小鼠心、脑、肝、肾由四氧嘧啶所致脂褐素含量的增高作用，提高超氧化歧化酶的活性；蒙古山萝卜酸对多种肝损伤具有保护作用。. 研究内容， MSA对肝纤维化大鼠肝组织中TGFβ1、PDGF、ERK及血清 MMP-1与TIMP-1的影响，对体外培养HSC MMP-1与TIMP-1 ，PC-Ⅲ与C-Ⅳ和凋亡的影响，对体外培养HSC TGFβ1、PDGFmRNA 表达的影响。. 主要研究结果，①防治肝损伤纤维化；②通过拮抗TGF-β1、PDGF影响HSC的增殖和阻碍HSC的形成，促使HSC 的凋亡；③提高MMP-1活性表达，抑制TIMP-1的活性，促进ECM（PC-Ⅲ、C-Ⅳ和HA、LN）的降解；④对TGFβ1、PDGFmRNA进行调节和控制；⑤该有效部位绿原酸与金丝桃苷是主要可控成分，动态研究绿原酸在药材不同部位中的变化，为药材采集时间与综合利用提供依据。. 蒙古山萝卜是传统蒙医防治肝性疾病的重要药物，其有效部位MSA对氧化诱导剂引起的肝损有保护作用，并且具有防治肝纤维化。课题从肝纤维化核心环节HSC分子水平解析MSA防治肝纤维化的调控靶点，明确MSA防治肝纤维化分子生物学机理，为防治肝纤维化药物的研制提供佐证。经分析蒙古山萝卜含有丰富的绿原酸与金丝桃苷，这可能是蒙古山萝卜治疗肝热性疾病的物质基础，这对药材采集的质量控制、相应制剂的研制与临床应用具有重要作用。