ERM家族在TGF-β诱导肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化进程中的机制研究

转化生长因子β（Transforming growth factor-β，TGF-β）是一重要促肾纤维化细胞因子，阻断TGF-β介导促纤维化反应可有效延缓肾纤维化进展。膜突蛋白（moesin）与埃兹蛋白（Ezrin）和根蛋白（radixin）结构功能上类似，统称为ERM(ezrin/radixin/moesin)家族。ERM家族在肾脏疾病中研究较少。我们前期研究结果提示moesin磷酸化修饰参与TGF-β诱导人肾小管上皮细胞转分化。在本研究中，我们利用体内和体外研究进一步观察 ERM家族在肾纤维化进程中作用。在体外研究中，我们观察TGF-β调控ERM表达的分子机制及其与TGF-β下游信号通路间关系，观察ERM与肾小管上皮细胞转分化关键环节间关系。在体内研究中，我们利用动物模型观察ERM表达与肾纤维化进展关联，及基因沉默后肾纤维化改善程度，为延缓肾纤维化提供新治疗靶标。

转化生长因子β（Transforming growth factor-β，TGF-β）是一重要促肾纤维化细胞因子，阻断TGF-β介导促纤维化反应可有效延缓肾纤维化进展。膜突蛋白（moesin）与埃兹蛋白（Ezrin）和根蛋白（radixin）结构功能上类似，统称为ERM(ezrin/radixin/moesin)家族。目前ERM蛋白在肾纤维化中研究较少。我们前期研究结果提示moesin磷酸化修饰参与TGF-β诱导人肾小管上皮细胞转分化。本研究利用体内和体外实验进一步观察 ERM家族在肾纤维化进程中作用。通过系列研究，我们首先利用激光共聚焦技术观察到ERM蛋白在人肾小管上皮细胞中表达定位，发现moesin和ezrin表达部位以胞浆和细胞膜外为主、radixin表达主要在胞浆中；其次，我们利用TGF-β刺激肾小管上皮细胞，利用real-time PCR和western blot技术观察ERM蛋白表达影响。我们结果表明，TGF-β可以刺激人肾小管上皮细胞表达moesin，通过erk信号通路诱导其发生磷酸化修饰，且其磷酸化修饰发生早于其对moesin蛋白激活作用，而ezrin和radixin表达差异不明显；再次，我们构建大鼠UUO动物模型，利用免疫组化技术观察术后不同组大鼠肾组织moesin表达变化，我们结果表明，随着手术后时间延长，结扎处大鼠肾组织中moesin表达增加，与肾组织间质纤维化程度一致，而对侧肾脏moesin表达无明显改变；最后，我们构建moesin shRNA，利用慢病毒转染至人肾小管上皮细胞，再利用TGF-β进行刺激，结果表明，敲低moesin表达以后可以部分拮抗TGF-β对人肾小管上皮细胞E-Cadherin蛋白表达影响。综上所述，本研究结果提示在ERM蛋白中，moesin部分参与TGF-β对肾间质纤维化作用，其主要通过与细胞表面黏附蛋白发生相互作用发挥功效。