TSP1蛋白保护视神经的分子机制及其活性短肽的筛选

视神经损伤变性的防治一直是眼科研究领域的热点，骨髓基质干细胞分泌的细胞间基质对神经损伤的修复具有显著的作用。我们前期研究证实：骨髓基质干细胞分泌的TSP1蛋白能促进视网膜神经细胞存活、轴突的生长以及突触的形成，随后也有相关报道与我们的结论一致。然而，TSP1蛋白结构复杂，它包括了5个不同活性区域，导致N、C末端功能不一致，目前人们对它保护神经作用的活性区域及其分子机制并不清楚。因此，本课题将通过构建TSP1中5个结构域的表达载体、转染视网膜神经节细胞等实验，揭示TSP1蛋白中具有保护视神经作用的活性区域；通过免疫共沉淀、蛋白质分离纯化以及质谱分析等方法，探讨TSP1保护视神经的分子机制；采用短肽微阵列筛选TSP1蛋白中保护神经元的活性小肽段，为将来视神经疾病的治疗提供依据。该研究将阐明TSP1蛋白保护视神经的分子机制，为神经退行性疾病、神经系统损伤防治提供新的基因靶点。

视神经损伤变性的防治一直是眼科研究领域的热点。TSP1蛋白能促进视网膜神经细胞存活、轴突的生长以及突触的形成，然而，TSP1蛋白结构复杂，目前对它保护神经作用的活性区域及其分子机制并不清楚。因此，本课题探讨了TSP1保护视神经的分子机制；筛选了TSP-1蛋白中保护神经元的活性短肽片段，为将来视神经疾病的治疗提供依据。主要研究成果包括以下3方面：（1）采用MTT方法分析了TSP1蛋白中的21条短肽，其中发现两条对视网膜神经元具有保护作用， 5条对胶质瘤有抑制作用，但对神经元没有作用；（2）TSP1保护神经元的分子机制方面：我们发现TSP-1一方面能促进神经元的存活，提高神经因子Synaptophysin的表达，同时能有效促进受损神经元的DNA的修复；（3）验证了TSP1是保护视神经细胞及抑制视网膜母细胞瘤的有效因子，并且揭示了其分子机制：a.TSP1在视网膜母细胞瘤中表达沉默，外源性TSP1能够抑制RB细胞活性；b.证明了TSP1可以引起RB细胞DNA损伤，并影响细胞非同源末端结合(NHEJ-C)的DNA修复；并且发现Rb1基因突变参与由TSP1引起的RB细胞DNA损伤；c.体外体内验证了TSP1对视网膜神经细胞的保护作用和对RB的抑制作用。该研究将阐明TSP-1蛋白保护视神经的分子机制，为神经退行性疾病、视网膜母细胞瘤及神经系统损伤防治提供新的基因靶点。