牙鲆eIF2α激酶基因HRI的抗病毒功能和机理研究

牙鲆HRI是鉴定的第一个鱼类HRI基因。本项目拟构建野生型、突变型和siRNA表达载体，转染细胞并进行筛选，分别获得HRI基因过量表达和功能缺失的细胞。检测这些细胞的抗病毒感染能力，明确HRI基因的抗病毒功能。采用免疫共沉淀方法研究HRI和底物eIF2α之间的相互作用，并进一步分析HRI发挥作用时底物磷酸化的变化，阐明HRI的抗病毒作用途径和机制。通过基因组步移的方法克隆HRI基因的启动子等关键顺式调控元件，进行缺失或突变，采用调控元件－报告基因系统分析其功能。并通过凝胶迁移率实验研究调控元件与反式因子之间的作用，阐明HRI基因的表达调控机理。本项目首次对HRI基因的抗病毒功能和机理进行探讨，对揭示HRI基因在非类红细胞中的功能具有重要意义，也为研究eIF2α激酶家族成员在抗病毒免疫中的功能联系奠定基础。