TaD1822调控EphB4/ephrinB2反向信号抑制肿瘤血管生成作用

Under the financial support by National Youth Natural Science Foundation of China, the applicant has established a co-culture model by VEGFR/Hek293 and A549 cell, and a lung tissue angiogenesis model induced by VEGF and A549 cell (Patent No. CN102321568A). The mechanism of inhibition on the lung cancer angiogenesis by TaD1611 was clarified, and it was that TaD1611 inhibited the phosphorylation of VEGFR and its downstream signaling molecule. On this basis, the applicant has so far published 15 papers (11 papers were published on SCI cited journals) as the first author or corresponding author, with the highest index factor 5.333. However, the clinic therapeutic outcome showed drug resistance was caused in a long treatment of inhibiting VEGF signaling molecules. It is therefore necessary to investigate every checkpoint in the process of angiogenesis in order to more effectively control the tumor growth. EphrinB2 is the controller in the VEGF signaling pathway. EphrinB2 inhibitor could serve as a substitution or combination therapy for the blocking agent of VEGF/VEGFR signaling pathway. TaD1822 is derivative of TaD1611 has showed obviously antiangiogenesis action. TaD1822 inhibits tumor angiogenesis by regulating EphB4/ephrinB2 reverse signaling, which is significant to clarify the TaD1822 mechanism from the point of multi-target and multi-path. The exploration might lay a good foundation for the new drug development of TaD1822.

在青年科学基金资助下，建立了VEGFR/Hek293和A549细胞共培养模型，VEGF和A549诱导的小鼠组织血管生成模型（已申请专利），阐明了TaD1611通过抑制VEGFR磷酸化途径抑制肺癌血管生成的作用机制；申请人以第一或通讯作者发表相关研究论文15篇（SCI论文11篇），最高影响因子5.333。然而临床结果表明调控VEGF信号对肿瘤血管的抑制作用会引起耐药性，有效控制肿瘤生长需要对血管生成的各个环节进行详细研究。EphrinB2在VEGF信号通路中扮演一个总调控者角色，阻断VEGF/VEGFR信号治疗肿瘤的同时，抑制EphrinB2代表了一种抗血管生成替代或组合疗法。深入研究TaD1611衍生物TaD1822调控EphB4/ephrinB2反向信号抑制肿瘤血管生成作用，对从多靶点、多途径阐明TaD1822抑制血管生成和肿瘤生长具有重要的意义，为将其开发成抗肿瘤血管生成药物奠定基础。

构建了高标的EphrinB2细胞（已申请专利，公开号：CN104694477 A），建立了高表达EphrinB2细胞膜色谱（EphrinB2/Hek293-CMC）模型并结合生物学技术阐明TaD1822对EphrinB2胞外/胞内配体结合区作用位点拮抗作用，同时运用荧光标记法验证了TaD1822对EphB4-Fc与EphrinB2结合的竞争性拮抗作用；采用RNAi等方法对EphrinB2作用靶点进行确证。构建EphrinB2基因高表达和低表达的细胞，运用细胞和小鼠组织模型研究了阐明TaD1822抑制肿瘤血管生成作用。考察TaD1822对EphB4/ephrinB2反向信号介导的肿瘤血管新生的影响。通过小鼠原位和移植瘤等整体药理学实验考察了TaD1822抑制肿瘤作用，并与临床上广泛使用的靶点药物进行优效性对比研究。深入研究了TaD1822对肝癌、肺癌、乳腺癌和结肠癌等肿瘤的抑制作用，阐明了TaD1822通过影响ephrinB2 PDZ结构域调控反向信号通路、抑制KDR、VEGFR3以及Akt通路等抑制肿瘤生长的作用机制。同时扩展了研究应用领域，运用建立的高表达EphrinB2/Hek293-CMC模型筛选考察了中药马钱子、黄柏、土鳖虫、蜈蚣和木鳖子等，系统研究了其抗肿瘤作用，同时也考察了TaD1822与筛选的活性成分小檗碱、马钱子碱等协同作用。通过项目的支持，不断开展相关研究工作，凝练了研究方向。. 通过上述研究，阐明了自主合成的靶向于EphrinB2的化合物TaD1822的抗肿瘤血管生成的作用。发表论文30篇（SCI论文27篇），其中第一和通信作者SCI论文25篇（10分以上文章1篇）；申请发明专利6项（其中第一完成人申请发明专利3项）。 在该项目的支持下，项目主持人与Arizona State University生物能源中心建立了良好的合作关系，目前已经联合发表文章6篇，其中2篇影响因子大于10分，3篇大于5分；联合申请专利2项。项目执行期间进行主要学术报告8次，其中国际会议报告4次；共培养研究生22人，其中博士研究生8人（国外留学生2人），硕士研究生14人（毕业7人）。申请人入选“陕西省中青年科技创新领军人才、西安交通大学首批青年拔尖人才。