基于代谢物群动态变化的清开灵注射液致过敏反应的寡肽物质基础及其作用机制研究

The principal adverse reaction of Qingkailing injection is allergic reaction, which could lead to death. In our previous studies, 275 oligopeptides were identified in Qingkailing injection initially, and some oligopeptides in this injection were reported to interact with the targets of allergic reactions. Some oligopeptides injections had caused severe allergic reactions in clinical. Therefore, it is speculated that some oligopeptides in Qingkaling injection may induce allergic reaction. A targeted metabolomics method was developed using LC-MS/MS and animal models of allergic reaction after the metabolites groups were screened by multivariate data analysis and information mining method, which could be utilized to distinguish differential metabolites from oligopeptides in Qingkaling injection. When Qingkailing injection, buffalo horn extract and oligopeptides were injected to animals respectively, the dynamic changes of metabolite groups in urine and plasma were studied to explore the oligopeptides material basis and mechanism relevant to the allergic reaction of Qingkailing injection. It is believed that this study not only makes a breakthrough in the study of allergic reactions, but also provides valuable basic research data for the quality evaluation of Qingkaling injection.

过敏反应是清开灵注射液的主要不良反应，严重者可因过敏性休克而死亡。申请人团队发现了275个清开灵注射液中未报道的寡肽类成分，其中某些寡肽成分可能作用于过敏反应相关靶点，同时临床上已有寡肽注射液引起严重过敏反应的病例报道，因此申请人推测清开灵注射液中存在的某些寡肽类成分可能是该注射液引发过敏反应的一类重要物质。本研究拟采用LC-MS/MS技术，结合多变量数据分析和信息挖掘等手段，借助动物模型，建立可同时监测多个过敏反应相关代谢物的靶向代谢组学方法，用于排除差异代谢物筛选时注射液中寡肽成分产生的干扰。通过研究动物分别给药清开灵注射液、水牛角提取液和单体寡肽类成分后血浆和尿液中代谢物群的动态变化，寻找与清开灵注射液致过敏反应相关的寡肽类成分，并探索该些成分诱导过敏反应的作用机制。本研究不仅有望在过敏反应研究思路上取得重要突破，还将为清开灵注射液质量评价提供有价值的基础研究数据。

中药注射剂突破了中药传统的给药方式，对急救患者发挥着重要作用。近年来，中药注射剂不良反应事件时有发生，发展面临着前所未有的严峻挑战。清开灵注射液是在传统名方“安宫牛黄丸”基础上制备的中药复方制剂，具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的功效，临床主要用于上呼吸道感染和脑出血等疾病的治疗。虽然清开灵注射液的临床疗效得到了广泛认可，但其临床应用安全性问题备受关注。过敏反应是清开灵注射液的主要不良反应，严重者可因过敏性休克而死亡。本研究采用液质联用技术，结合多变量数据分析和信息挖掘等手段，借助BN大鼠过敏模型，通过非靶向代谢组学和靶向代谢组学研究，有效筛选鉴定出61个过敏潜在相关差异代谢物，涉及氨基酸、脂肪酸、核苷酸碱基和有机酸等，且大多数过敏相关的内源性代谢物可能会作用于过敏相关的靶点，如ACE、PTGS2和PPARG等。以61个过敏相关差异代谢物为研究对象，基于建立的靶向代谢组学方法，对给药清开灵注射液和水牛角提取液后大鼠内源性代谢物群动态变化进行了研究，研究发现水牛角提取液和清开灵注射液引起的过敏反应相关代谢物部分重合，提示水牛角提取液可能是清开灵注射液引起过敏反应的一个因素。通过对给药寡肽类成分后大鼠内源性代谢物群动态变化进行研究，发现旋光异构寡肽、不同种类氨基酸构成的寡肽、不同肽链长度寡肽对潜在过敏代谢物群具有不同的影响，推测清开灵注射液中寡肽类成分可能是协同引起过敏反应，肽链越长引起过敏反应的可能性越大，同时可能与作用于ACE、HLA-A和PTGS2等过敏靶点有关。本研究为清开灵注射液质量评价提供了有价值的基础研究数据，有助于中药现代化发展。