清开灵注射液致Ige介导的Ⅰ型超敏反应变应原组学研究

清开灵注射液是迄今为止组方最具代表性的现代中药制剂。因其市场份额较大、不良反应发生率较高而引发了全社会对中药注射剂的信任危机。本课题在前期工作基础上，针对清开灵注射液致Ige介导的Ⅰ型超敏反应，采用代谢组学研究方法，应用LC-MS、GC-MS和NMR三种检测技术进行多维多息数据采集，建立多元数据融合方法，明确其代谢组学特征，确定候选生物标记物；在此基础上，进行化学成分组-代谢轮廓-过敏反应强度之间相关性分析，揭示清开灵注射液中小肽类、有机酸类、生物碱类以及色素类成分与Ige介导Ⅰ型超敏反应的相关性，建立变应原组学研究方法，明确致Ige介导Ⅰ型超敏反应的变应原组学特征。课题的完成为探索代谢组学中多元数据的处理方法提供参考，为建立清开灵注射液科学的质量评价方法提供数据，对探索中药注射剂急性过敏反应物质基础研究具有启发意义。

近年来，中药注射剂不良反应引发了严重的临床信任危机。清开灵注射液是不良反应发生例数最多的药物之一，主要表现为急性过敏反应，包括Ige介导的Ⅰ型超敏反应和类过敏反应。本项目的主要研究内容：.1、清开灵注射液致IgE介导Ⅰ型超敏反应动物模型研究.本项目首先筛选清开灵注射液抗血清的造模方法和时间点，然后以明确含有抗体的血清对大鼠进行被动皮肤过敏实验，确认能够发生过敏反应的大鼠和不能发生过敏反应的大鼠，进而建立清开灵注射液致IgE介导Ⅰ型超敏反应动物模型。.2、代谢组学分析方法研究.建立了基于UPLC-Q-TOF/MS和HPLC-LTQ-Orbitrap的代谢组学研究技术平台，包括数据采集、多变量统计分析、差异代谢物寻找、潜在生物标记物结构推断、代谢通路分析等，完成了尿液、血液、下丘脑等不同种类生物样品代谢组学和脂质组学分析。.3、.完成了清开灵注射液中各类可疑致敏化学组分富集制备方法研究 .清开灵注射液中可疑致敏化合物分成小肽类、有机酸类、生物碱类和色素类，按照制剂工艺，分别单独提取这些组分主要来源的药材，各组分再加入清开灵注射液中，得到针对各类组分的实验样品。富含小肽类部位通过酸水解水牛角、碱水解珍珠母后，按照制剂工艺配比得到；富含有机酸类化合物部位通过水提、醇沉金银花药材得到；富含生物碱部位通过水提、醇沉板蓝根药材得到；富含色素部位通过水提、醇沉栀子药材得到。.4、.建立了潜在生物标记物可靠性推断方法.本研究取多组不同时间点进行代谢组学多变量统计分析，根据聚类结果，确定整个扰动后生物体整体代谢波动情况，进行代谢足迹分析，然后考察不同时间点的生物标记物，利用person相关分析和ROC曲线寻找这下生物标记物之间的相关性，确定可信度高的生物标记物，并进行基于疾病模型的与蛋白网络关分析，佐证这些 生物标记物的可靠性.5、.建立了基于代谢组学研究中寻找生物标记物思路进行中药体内药源性成分的检测方法.应用代谢组学思路，进行大鼠体内清开灵注射液药源性成分的查找，该方法不但有效地扣除了药源性成分在代谢组学数据处理过程中造成的干扰，而且补充了中药体内药源性成分的发现方法，应用此项技术进行了大鼠尿液中清开灵注射液的药源性成分发现研究。.结果：SD大鼠致敏造模成功率约40%，过敏反应扰动了花生四烯酸通路，清开灵注射液中残留的原蛋白和酪蛋白是潜在的致敏原。