HBx调节CTHRC1表达的分子机制及其在介导肝癌形成中的作用研究

Up to now, the molecular mechanism which hepatitis B virus promoted the formation of hepatocellular carcinoma (HCC) is unclear. Studies have shown that CTHRC1 play an important role in the occurrence and development of carcinogenesis. Does CTHRC1 play a role in HBV promotion HCC?Can HBV upregulate the expression of CTHRC1? These questions have not been answered.Our previous investigtion showed: the expression of CTHRC1 in HBV-associated HCC was significantly higher than in the adjacent noncancerous; HBV directly upregulate the expression of CTHRC1; HBx activates CTHRC1the expression at the transcriptional level. So we speculate that the viral protein HBx upregulates the significantly high expression CTHRC1and participate in a variety of malignant phenotype regulation to promote HCC formation. We intends to investigate HBx regulation the expression of CTHRC1 at different levels: detection CTHRC1 expression correlation with HBV staging and prognosis, HCC formation and the malignant phenotype which HBV promoted were observed after inhibiting CTHRC1 expression in vivo of HBV transgenic mice .The results will help people to understand the molecular mechanism which the viral protein regulate the host signal networks and to find out the new potential antiviral targets.

迄今为止，乙肝病毒致肝癌形成的分子机制不太明确。目前有研究表明CTHRC1在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。但是关于CTHRC1是否在 HBV 致肝癌形成中发挥作用？HBV 能否诱导其表达上调？尚无研究报道。我们前期研究发现：CTHRC1在乙肝相关肝癌组织中表达显著高于癌旁组织；HBV 直接诱导 CTHRC1表达上调； HBx在转录水平激活CTHRC1表达。据此推测：HBV通过其病毒蛋白HBx诱导CTHRC1显著高表达，参与多种恶性生物学表型调控，从而促进肝癌形成。本项目拟从检测CTHRC1表达与乙肝致肝癌病理分期及预后的相关性；探讨HBx调控 CTHRC1表达的信号通路网络；在HBV 转基因鼠体内抑制CTHRC1表达后观察其对乙肝致肝癌形成及恶性表型的影响等层面进行研究。本项目的研究结果不仅有助于完善病毒蛋白 HBx调控宿主信号网络分子机理，更为临床治疗乙肝相关肝癌提供全新的思路。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是导致肝脏疾病的主要原因，从爆发性肝炎到肝硬化阶段，最终发展成肝癌（HCC）。胶原三螺旋重复蛋白1（CTHRC1）是一个多功能的分泌蛋白，与癌症细胞的侵袭和迁移具有紧密联系。然而，关于CTHRC1与HBV感染之间的关系还没有研究和报道。本项目致力于研究乙肝病毒与胶原三螺旋重复蛋白1（CTHRC1）之间的关系。研究发现：（1）HBV感染导致的肝细胞癌的癌组织中的CTHRC1的mRNA和蛋白水平明显高于癌旁组织，同时HBV感染患者血清中的CTHRC1表达量明显高于正常健康者血清中的表达量；（2）HBV主要通过NF-κB和CRE两条信号通路激活CTHRC1启动子活性来诱导CTHRC1表达，（3）将HepG2.2.15细胞植入裸鼠皮下，利用重组腺病毒CTHRC1-RNAi-AD抑制CTHRC1基因表达，结果显示，对比于感染无义RNAi和空白细胞组裸鼠皮下的肿瘤，CTHRC1-RNAi-AD感染组的肿瘤出现的时间推迟，增长的速率减缓。最终生成肿瘤的体积和重量都小于无义RNAi对照组和空白细胞组；（4）HBV感染的病人和携带HBV基因组的肝癌细胞中CTHRC1表达被激活；（5）CTHRC1启动子活性、mRNA和蛋白表达都被甲基转移酶3a（DNMT3a）所抑制，但被siDNMT3a所激活，说明DNMT3a介导CTHRC1的表达；（6）过表达CTHRC1激活HBV复制，敲出CTHRC1基因抑制HBV复制；（7）PKC、ERK、JNK和c-Jun介导CTHRC1调控的HBV复制；（8）CTHRC1促进HBV复制是通过激活PKC/ERK/JNK/c-Jun信号级联反应以抑制IFN/JAK/STAT通路的抗病毒活性。因此，我们揭示了一个新的机制：HBV捕获细胞因子和信号级联以逃避宿主免疫和维持持续感染。除此之外，我们还发现了HBV感染肝细胞过程中CTHRC1的一个新功能。该研究对丰富HBV致癌机理有重要意义，有望为HBV相关肝癌的分子靶向治疗提供理论依据。