DNA解旋酶RECQL1在HBx诱导肝癌发生中的作用及分子机制研究

乙型肝炎病毒（HBV）感染是肝癌发生的主要诱因，其编码的x蛋白（HBx）在HBV诱导肝癌的发生中发挥着重要作用。染色体的不稳定性提高是肿瘤形成的重要机制之一。HBx的表达可促进细胞染色体不稳定性的发生，进而诱导肝癌的发生。目前关于HBx降低细胞染色体的稳定性并诱导肝癌形成的分子机制还不甚清楚。RECQL1可有效抑制染色体不稳定性的发生，且与癌症的发生高度相关。为了进一步探索HBx促进肝癌发生的分子机制，本课题拟在发现并初步验证HBx与RECQL1间相互作用的基础上，通过研究HBx对RECQL1抑制染色体不稳定性功能的干扰而促进肝细胞的恶性转化，来阐明HBx的致癌性与RECQL1间的相关性，从而揭示HBx促进肝癌发生的一种新机制。本研究结果将促进对HBx的生物学功能、HBV感染诱导肝癌发生机制、HBV与宿主相互作用的理解与研究，并为相关药物的筛选提供理论依据。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是肝癌发生的主要诱因，其编码的x蛋白（HBx）在HBV诱导肝癌的发生中发挥着重要作用，但其详细分子机制尚不甚明晰。RECQL1是一种重要的肿瘤标记分子，在多种癌症组织如肝癌、肺癌、乳腺癌等组织中高丰度表达，可有效调节肿瘤细胞的增殖，在癌症的发生、发展中发挥着重要作用，同时也是一个重要的癌症治疗的潜在靶位点。本研究通过酵母双杂交、免疫共沉淀、亚细胞共定位等手段发现HBX与RECQL1间可发生离体相互作用。构建了HBX、RECQL1的不同缺失突变体，以期确定介导二者相互作用的结构域。同时，合成了超折叠绿色荧光蛋白基因sfGFP，构建了与6XHis-sfGFP tag融合的HBX表达载体，实现了HIS-SFGFP-HBX融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化，为研究HBX的结构、抗体制备及检测与RECQL1间的内源性相互作用奠定了基础。另外，为了进一步探索HBV的致病机理，与其他单位合作完成了人肝脏蛋白质相互作用连锁图的构建，该成果已予以发表。由于本研究未检测到HBX的表达对RECQL1抑制染色体异常功能的影响，同时最近的研究表明，RECQL1可调节与细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭相关的基因的表达水平，从而促进细胞周期进程、细胞的增殖及运动，最终促进肿瘤的形成及发展。因此，HBX可能通过与RECQL1间的相互作用而调节RECQL1的靶作用基因，改变细胞周期及细胞运动的特性，从而促进肝癌的发生与发展。