深低温停循环术后早期NFκB对海马神经细胞的保护作用机理研究

深低温停循环（DHCA）是目前临床治疗复杂先心病和主动脉瘤的重要手术方式。该技术不仅可以最大限度为手术提供良好的操作环境，同时还可以起到脑保护作用。DHCA的应用已经极大的改善了病患术后的神经系统损伤等问题，但其作用机制并不清楚。我们近来发现在DHCA术后早期对实验动物海马神经元的保护作用中，NFκB的激活起到了非常关键的作用，NFκB很可能通过调控BCL-2、BAX和GADD45β等凋亡相关基因的表达实现对神经元的保护，但NFκB在DHCA的情况下调节细胞凋亡相关分子改变的机制目前还不清楚。本课题拟利用体内外模型对DHCA激活NFκB抑制海马神经细胞凋亡的分子机制进行深入研究，为临床减少DHCA术后并发症提供理论依据。

深低温停循环（DHCA）是目前临床治疗复杂先心病和主动脉瘤的重要手术方式。该技术不仅可以最大限度为手术提供良好的操作环境，同时还可以起到脑保护作用。DHCA的应用已经极大的改善了病患术后的神经系统损伤等问题，但其作用机制并不清楚。通过本课题研究，我们发现脑缺血再灌注损伤（CRI）模型组24hr内NFκB转录水平逐渐升高，至24hr达到最高，随后下降。然而，DHCA模型组12hr内NFκB转录水平变化不显著，至术后24hr时，升高至正常的2倍，随后逐渐降低。CRI和DHCA组中GADD45β的转录水平均逐渐升高，其中CRI组的变化更为显著，而DHCA组内GADD45β的转录变化仅为术后0hr对照组的2倍。CRI组织中NFκB以及NFκB磷酸化水平均显著升高，DHCA模型组NFκB以及NFκB磷酸化水平与正常对照组相比没有统计学差异，而与CRI组相比显著降低。免疫印迹结果显示CRI和DHCA组中GADD45β的蛋白表达水平在术后24hr内均逐渐升高。荧光素酶报告基因检测结果证实体外使用氧糖缺乏条件处理HT-22细胞后，GADD45β的表达与NFκB活化有关。在体外实验中，我们证实HT-22细胞氧糖缺乏条件模型中PDTC对c-Jun、MEKK7、GADD45β和Bcl-2表达的调控作用。同时，我们还发现并证实GADD45β信号通路在OGD+低温保护条件下抑制海马神经元细胞凋亡的重要作用。通过合成3p修饰的siMEKK4，干涉OGD+低温保护条件下海马神经元细胞内MEKK4的表达，可显著降低细胞的凋亡。.通过本研究证实NFκB和NFκB磷酸化在脑组织缺血再灌注的过程中被活化，而DHCA则可以缓解或者限制该过程的活化或启动。同时，NFκB的磷酸化水平升高与GADD45β的表达升高相关，GADD45β信号通路的活化极有可能在DHCA保护条件下抑制海马神经元细胞损伤过程中发挥重要作用。