逆针灸干预DMBA诱发SD雌性大鼠乳腺癌癌前病变的作用机制

Abstract:Our preliminary study discoverd that pre-acupuncture under the guidance of the meridian syndrome differentiation could significantly reduce the incidence of breast cancer and tumor-burdened number, slow down the process of pathological evolution of breast cancer. And adjust the expression of ER、PR and the concentration of CA15-3.These show that the pre-acupuncture is capable to effect the proliferation, differentiation and apoptosis. In the process of continuous about breast cancer from normal to general hyperplasia toatypical hyperplasia to carcinoma in situ to invasive carcinoma .Especially atypical hyperplasia of the precancerous stage. In order to further clear the pathways of pre-acupuncture in the process of the continuous . Taking the DMBA induced production conforms to animal models of human breast cancer evolution. Through dynamic observation in different periods of breast tissue pathology change to observe the differentiation of tumor cells. At the same time observe the key molecules that is closely related to breast cancer biology behavior in the present study. With ERα、ERβ、PRα、 PRβ、CerbB-2、PTEN、ki67、PCNA indirectly indirectly reflect the tumor cell proliferation, with P53、bcl-2、TNUEL method indirectly reflect the tumor cell apoptosis. From normal mammary epithelial cells to the malignant transformation of the gradual process, to explore the mechanism of action with the main point of Zusanli、Sanyinjiao、Danzhong to prevent or reverse precancerous lesions.

前期研究发现，经络辨证指导下的逆针灸能够明显降低雌性SD大鼠自发性乳腺肿瘤和DMBA诱发的乳腺癌的发病率和荷瘤数，减缓病理演变过程，调整ER、PR的表达和CA15-3的浓度，表明逆针灸能够调节肿瘤细胞增殖、分化和凋亡。为进一步明确逆针灸在乳腺癌“正常→一般增生→非典型增生→原位癌→浸润性癌”谱带式连续过程中的各个阶段，尤其是癌前病变阶段，其调节肿瘤细胞增殖、分化和凋亡的作用及其可能的作用途径。拟以DMBA诱发乳腺癌演变过程的动物模型，动态观察乳腺组织病理学变化(细胞分化)，观察与乳腺癌生物学行为密切相关的关键分子，以ERα、ERβ、PRα、PRβ、CerbB-2、PTEN、ki67、PCNA间接反映肿瘤细胞增殖情况，以P53、bcl-2及TUNEL法间接反映肿瘤细胞凋亡情况，探讨以足三里、三阴交、膻中为主穴的针刺方法在正常乳腺上皮细胞向恶性转化的渐进过程当中阻止或逆转癌前病变的作用机制。

目的：在前期研究基础上，从细胞增殖以及凋亡的角度进一步探讨经络辨证逆针灸干预乳腺癌形成过程中可能的作用机制。方法：选取6周龄清洁级雌性SD未孕大鼠40只，随机分为4组（空白对照组、模型组、他莫昔芬组和逆针灸组）。采用DMBA单次灌胃（100mg/kg）诱导自发性乳腺癌模型，空白对照组给予等量芝麻油灌胃。于造模后一周对治疗组进行干预，持续16周。治疗结束后，检测肿瘤发生情况、乳腺肿瘤组织病理学情况、乳腺癌生物行为关键分子表达情况。结果：通过对各实验组发生肿瘤的大鼠数量进行卡方检验统计，结果显示发生肿瘤的大鼠数量在各组内的分布具有显著性差异。通过对各组乳腺组织不同类型病变的分布进行多个构成比比较的卡方检验，提示各组间组织病理学分布具有明显差异。免疫组化染色ERβ、PR、PTEN、p-AKT、ki67、Caspase-3并对其阳性染色面积进行统计学分析，结果显示与模型组相比，各治疗组乳腺肿瘤组织ERβ阳性表达均显著降低，差异具有统计学意义，以逆针灸组作用更为显著；与模型组相比，各治疗组乳腺肿瘤组织PR阳性表达均升高，但差异无统计学意义；与模型组相比，他莫昔芬组及逆针灸治疗组乳腺组织PTEN阳性表达评分均显著升高，逆针灸组升高更为显著；各治疗组乳腺组织Ki67阳性细胞率均显著降低；他莫昔芬组及逆针灸治疗组乳腺组织p-AKT阳性细胞数量均显著减少；逆针灸组及他莫昔芬组大鼠乳腺组织Caspase-3阳性表达率均显著升高。TUNEL免疫荧光染色检测各组大鼠乳腺肿瘤组织中细胞凋亡水平，结果显示与模型组相比，逆针灸及他莫昔芬组乳腺组织中TUNEL阳性细胞数量显著增加。Western Blot法检测各组乳腺肿瘤组织Bcl-2，Bax表达，结果显示与模型组比较，逆针灸组及他莫昔芬组大鼠乳腺肿瘤组织Bcl-2/Bax比值均显著增高。结论：经络辨证逆针灸通过多环节、多途径、多靶点的整体调节作用起到防治乳腺肿瘤的目的，逆针灸能够调控激素受体的表达及多个乳腺癌生物行为关键分子起到影响肿瘤细胞的凋亡和增殖的作用，其中主要作用途径可能与细胞增殖和凋亡相关分子信号转导途径PTEN-PI3K/p-AKT有关。