益气养阴活血法预处理内皮祖细胞促缺血心肌血管新生作用及机制研究

Although many Coronary Heart Disease patients benefitted from revascularization of coronary, but the blood vessel may restenosis and the cost was high.The experts tried to solve it by improving the quantity and function of endothelial progenitor cells(EPCs), but the effective medicine was still absent. Many studies showed that replenishing Qi, nourishing Yin and activating Blood Circulation could improve the quantity and function of EPCs and promote angiogenesis, but they were still not thorough enough. Yangxin Tongmai Recipe could replenishing Qi, nourishing Yin and activating Blood Circulation. According to the former studies, we try to separate EPCs and observe the influence of endothelial progenitor cell pretreatmented with Yangxin Tongmai Recipe on proliferation, migration and conglutination of EPCs. Then we observe the influence of EPCs pretreatmented with Yangxin Tongmai Recipe on infarction size. We measure the microvessel density and the level of expression of angiogenesis factors proteins and DNA in the periphery zone and in atherosclerosis plaques in rabbit model with acute myocardial infarction. Base on the results above, we try to expound the effect of replenishing Qi, nourishing Yin and activating Blood Circulation on the quantity and function of EPCs, while looking for the scientific evidence for neovascularization in ischemic myocardium by the method and the more reasonable method for transplantation of EPCs.

尽管冠脉血运重建治疗使许多冠心病患者获益，但仍存在血管再狭窄、费用高等不足。目前的研究重点，集中在改善内皮祖细胞数量和功能以促进血管新生方面，但尚无成熟的临床药物可供使用。许多研究证明益气养阴活血法可促进血管新生并改善内皮祖细胞的数量和功能，但缺乏对相关成熟方剂的深入研究。养心通脉方具有益气养阴，活血通脉之功，临床疗效可靠。据此，我们分离培养内皮祖细胞，观察养心通脉方含药血清对其增殖、迁移和粘附能力的影响。其次运用静脉给药和缺血心肌局部给药的不同方式，观察含药血清预处理内皮祖细胞对急性心肌梗死兔的梗死面积的影响，并同步测定缺血心肌区和主动脉粥样硬化斑块内的微血管密度及血管生长因子水平，阐述益气养阴活血法对内皮祖细胞数量和功能的影响，并观察该法预处理内皮祖细胞的促血管新生作用及副反应的发生情况，为益气养阴活血法促缺血心肌血管新生提供科学依据，并为进一步寻找更合理的内皮祖细胞移植方法提供借鉴。

改善内皮祖细胞（EPCs）数量和功能以促进缺血心肌血管新生是治疗冠心病的一个重要途径和方法。我们首先通过分离培养EPCs并行Dil-acLDL和FITC-UEA-1双标鉴定，采用CCK-8法，观察养心通脉方含药血清对EPCs功能影响的时效和量效趋势，其次采用心肌局部注射和耳缘静脉注射两种方式对动脉粥样硬化和急性心梗双模型兔注射最佳时效和量效的养心通脉方含药血清预处理EPCs液，在术后1周和2周对双模型兔进行超声心动图检测，同时进行免疫组化染色以及CD34阳性反应强度检测以分析梗死心肌、缺血心肌和主动脉粥样硬化区的新生血管密度，同时运用分子生物学方法检测血管新生因子水平。结果显示：养心通脉方含药血清的含药浓度及干预时间与EPCs线粒体活性呈线性关系，在含药浓度为10%与干预96h时EPCs的增殖、迁移、黏附能力明显增强（P＜0.05）；术后2周，与模型组相比较，干预组能显著降低左室舒张及收缩末期内径，提高射血分数及心排血量，抑制主动脉粥样硬化区和促进缺血心肌区、梗死心肌区血管新生，新生血管密度：缺血心肌区＞梗死心肌区＞正常心肌区（P＜0.05），但两种不同给药方式及术后1周干预组与模型组心功能情况和血管新生密度比较均无明显差异(P＞0.05)；术后2周，养心通脉方能够促进梗死心肌区和缺血心肌区的重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、缺氧诱导因子1α（HIF1α）表达及抑制血管生成抑制素（Ang）、转化生长因子β（TGF-β）表达水平（P＜0.05或P＜0.01），能够促进主动脉粥样硬化区的Ang、TGF-β表达和抑制bFGF、VEGFR2、VEGF表达（P＜0.05或P＜0.01）。上述结果表明，具有益气养阴活血作用的养心通脉方可能是通过调节相关区域血管生成因子表达及增强EPCs功能，从而促进梗死心肌区、缺血心肌区血管新生，同时抑制主动脉粥样硬化斑块内的血管新生，提高心功能，并可能具有一定稳定粥样硬化斑块的作用，且研究中两种给药方式均能起到同样的效果，为临床应用益气养阴活血法治疗缺血性心脏病提供新的理论依据。