可溶性CD160分子阻遏宫颈癌免疫逃逸的作用及其机制研究

The therapeutic effect of tumor immunotherapy depends on the activity of tumor antigen specific T cells ultimately. Our past studies have demonstrated the increasing expression of negative regulators of co-stimulatory signals in T lymphocytes in tumor microenvironment, which induces T cell anergy to accept immune escape. The enhancing activity of tumor specific T lymphocytes can be achieved by blocking these signals. CD160-HVEM has been identified as a new inhibitory signal pathway of T cells activation. Although high expression of CD160 and HVEM in cervical cancer tissue and SiHa cells is proved in our primary studies, its underlying functions and mechanisms in immune escape remain unclear. This project plans to investigate the functions and mechanisms of soluble CD160 extracellular segmant molecule to repress cervical cancer immune escape. Here, we describe the pathological expression and distribution of CD160 and HVEM and analyze the function and activity of infiltrating T lymphocytes in tumor tissue. Then, using mixed lymphocytes culture and experimental tumor model of immunological reconstitution SCID mice, we attempt to validate that soluble CD160 may play an important role in the reversal of T lymphocytes anergy and repression of tumor immune escape in vitro and vivo by blocking CD160-HVEM signal pathway. It will be interesting to establish a novel tumor immunotherapy modality.

肿瘤免疫治疗效果取决于免疫细胞的功能活性。我们以往研究发现肿瘤微环境可高表达某些负性共刺激信号分子诱导T细胞"无能"来实现免疫逃逸，阻断该信号可增强肿瘤特异性T细胞活性。CD160-HVEM是新发现的T细胞活化抑制性信号通路，我们前期研究显示宫颈癌组织和SiHa细胞均高表达CD160和HVEM分子，但其在宫颈癌免疫逃逸中的作用及机制尚不清楚。本项目拟选取宫颈癌为研究对象，从分子、细胞和整体三个水平研究可溶性CD160分子阻遏肿瘤免疫逃逸的作用和机制。通过分析CD160、HVEM分子在病变组织的表达分布及局部浸润T细胞功能活性状况，阐明CD160-HVEM通路在癌变进展过程中诱发的免疫逃逸作用和机制；利用可溶性CD160分子阻断CD160-HVEM信号，在体外混合淋巴细胞培养和免疫重建肿瘤动物模型中验证其逆转T细胞"无能"、阻遏肿瘤免疫逃逸的作用；为建立一种新的肿瘤免疫治疗模式提供依据。

肿瘤特异性淋巴细胞的活性决定了肿瘤免疫的方向和肿瘤免疫治疗的效果，而表达于淋巴细胞上的正性和负性共刺激分子的平衡决定了淋巴细胞反应的方向。CD160是较新发现的一种共刺激分子，其表达与慢性病毒感染个体中的T淋巴细胞功能低下和个体持续病毒感染有关，被认为是病毒特异性T淋巴细胞“耗竭”的标志之一。然而，CD160与肿瘤特异性T淋巴细胞功能受损之间的关系还不清楚。本研究拟阐明CD160分子的表达及信号通路在肿瘤发展过程中与肿瘤特异性T淋巴细胞免疫逃逸的关系及机制，试图为建立一个新的肿瘤免疫治疗模式提供依据。.本研究发现：⑴在宫颈的癌变过程中，宫颈上皮细胞持续高表达CD160的配体——HVEM分子，且随着癌变的进展，CD160和HVEM在宫颈局部的表达也呈现上升趋势；TC-1肿瘤细胞荷瘤小鼠模型也得到类似的结果，CD160和HVEM在肿瘤组织局部浸润的淋巴细胞和脾淋巴细胞上的表达水平均在小鼠接种肿瘤细胞后逐渐上升；荷瘤小鼠脾淋巴细胞在体外经特异性肿瘤抗原刺激后，其CD160和HVEM的表达也进一步上调。以上结果证实淋巴细胞上的CD160、HVEM分子与肿瘤特异性免疫应答的调节有关。⑵CD160的表达上调与荷瘤小鼠脾CD8+T细胞的增殖活性以及穿孔素、IFN-γ表达水平降低有关，阻断CD160和HVEM的相互作用可部分逆转CD160对CD8+T细胞活性的抑制。以上结果证实CD160在肿瘤免疫过程中诱导和维持CD8+T细胞“无能”或“功能受损”状态并可作为该状态的分子标志。⑶成功构建小鼠CD160胞外段的真核表达载体，可溶性CD160胞外段分子可通过阻断HVEM信号传导通路增强淋巴细胞的增殖、细胞因子分泌和特异性杀伤等免疫活性，体内表达sCD160可趋化淋巴细胞，上调肿瘤微环境中正性免疫分子IFN-γ、IL-2的表达并下调负性免疫分子IL-10、TGF-β和Foxp3的表达，从而有效抑制TC-1荷瘤小鼠的肿瘤生长和转移，并延长小鼠成瘤潜伏期和荷瘤小鼠生存时间。⑷成功构建人CD160胞外段的真核表达载体，人源化免疫重建SiHa细胞荷瘤小鼠体内转染后能有效推迟小鼠的成瘤时间并抑制肿瘤生长。.本研究为宫颈癌的免疫治疗提供了一个新的有希望的治疗靶点。