CCL19通过CCR7/PI3K/Akt信号通路激活HBV特异性CD8+ T细胞应答的细胞及分子机制研究

Hepatitis B virus can lead to immune tolerance. Identification of a signal pathway which can be manipulated is a hotspot in curing chronic HBV infection. CCL19 is known as an important component to help DCs mature and splenic T cells activation via PI3K/Akt pathway, but little is known as how CCL19 modulates the function of hepatocytes. Our preliminary data show that CCL19 can activate hepatocytes CCR7/PI3K/Akt pathway and CD8+ T cell response. However, the effect of HBV clearance and underlying molecular mechanism remains unknown. We hypothesize that, CCL19 modulates the function of hepatocytes and DCs to activate CD8+ T cellular response via CCR7/PI3K/Akt pathway, resulting in the clearance of HBV. To test this hypothesis, we will study on effects and mechanisms of exogenous CCL19 to activate hepatocytes immune repsonses, CD8+ T cellular responses and promote HBV clearance at the two levels of immune activation and virus clearance by manipulating the activation of CCR7/PI3K/Akt signal pathway using mouse primary hepatocytes and chronic HBV infectious mouse model. This study will provide scientific theories for the development of a therapeutic vaccine or drug of chronic HBV.

慢性HBV感染可致免疫耐受，寻找可有效人工干预的信号通路是治疗慢性HBV感染的热点和难点。CCL19已被证实通过PI3K/Akt信号通路在DCs成熟及脾脏T细胞活化中起重要作用，但其对肝脏细胞功能状态的影响仍知之甚少。我们初步实验结果提示CCL19可激活肝脏细胞CCR7/PI3K/Akt信号通路及CD8+ T细胞应答，但清除HBV的效果及分子机制还有待进一步探讨。我们提出假说：CCL19将通过CCR7/PI3K/Akt信号通路调节肝脏细胞和DCs功能状态激活CD8+ T细胞应答，促进HBV清除。为了验证这一假说，我们将通过小鼠原代肝细胞和慢性HBV感染小鼠模型，从免疫活化和病毒清除两个层面，人工干预CCR7/PI3K/Akt信号通路的活化，研究外源性CCL19激活肝脏细胞免疫、CD8+ T细胞应答及促进HBV清除的效果及机制。本研究将为开发慢性HBV感染治疗性疫苗或药物提供科学理论依据。

CCL19是一种白细胞趋化剂，在细胞运输和白细胞激活中起着至关重要的作用。在HBV非细胞性感染中，功能失调的CD8+ T细胞在持续性HBV感染中起关键作用。然而，尚不清楚是否可以通过CCL19激活的免疫清除HBV。在本研究中，我们评估了CCL19对HBV感染患者PBMC激活的影响。我们还检查了CCL19如何在慢性乙型肝炎（CHB）小鼠模型中影响HBV清除率并调节HBV反应性T细胞。此外，使用CCR7组合式小鼠阐明了CCL19/CCR7轴诱导的免疫激活的潜在机制。从体外实验中，我们发现CCL19蛋白使来自患者的Ag反应性IFN-γ+ CD8+ T细胞的频率提高了大约两倍，而CCR7敲低部分抑制了IFN-γ的分泌。在小鼠中，CCL19过表达导致肝内HBV的快速清除，这可能是由于肝内CD8+ T细胞比例增加，血液中PD-1+ CD8+ T细胞频率降低以及肝APC抑制作用减弱，淋巴细胞产生的Ag-反应性的Th1和Th2类细胞因子。在CCL19过表达和CCR7基因敲除的CHB小鼠中，CD8+ T细胞激活诱导的细胞死亡（AICD）的频率增加，并且观察到高水平的Ag反应性TNF-α和低水平的CD4+和CD8+ Treg细胞。这项研究的发现可以更好地理解CCL19/CCR7轴对宿主免疫系统的调节作用，这可能会促进通过克服T细胞耐受性来解决HBV感染的免疫治疗策略的发展。