乙肝相关肝细胞肝癌中CD8+ T细胞抗HBV抗原特异性研究

CD8+ T cells play an important role in the development and progression of hepatocellular carcinoma (HCC), precise targeting CD8+ T cells to HCC related tumor antigen is one of the keys for improving the therapeutic effect of HCC. It was shown hepatitis B virus which was playing vital role in HCC development can be integrated into the genome of HCC; experiments in mouse shown that adoptive transfer of HBV specific CD8+ T cells (HBV-CD8+ T) to the HBV related HCC (HBV-HCC) containing mouse resulted in the clearance of HCC and can reduce the recurrence of tumor, implying that the importance of HBV-CD8+ T in the controlling HCC. Unfortunately, there is still lacking deep understanding in CD8+ T cells specificity against HBV antigens in HBV-HCC. So, this project is planning to use different HBV peptides to test the CD8+ T cells specificity against HBV antigens within peripheral blood mononuclear cell and tumor tissue for the strongest antigens; and further experiments will be done using HBV-CD8+ T to test these T cells cytotoxicity agaist HBV-HCC. All these experiments will provide evidence for adoptive T cell therapy for HBV-HCC and for further experiments.

CD8+ T细胞在抗肝细胞肝癌（HCC）中起重要作用，提高CD8+ T细胞对HCC相关抗原的识别是提高HCC疗效的关键。研究表明在HCC发生中起重要作用的乙型肝炎病毒（HBV）可被整合到HCC基因组中，且动物实验示过继HBV特异CD8+ T细胞（HBV-CD8+ T）可有效清除动物内HBV相关HCC（HBV-HCC）及阻止HCC复发，说明了HBV-CD8+ T抗肿瘤重要性。但人们对HBV-HCC组织内CD8+ T细胞对HBV抗原谱具体识别情况尚缺乏深入认识。本课题拟采用HBV蛋白的抗原肽段（peptide）对HBV-HCC肝组织及外周血中CD8+ T细胞识别HBV抗原（epitope）情况进行筛查，找出在人HBV-HCC中起主要作用的HBV抗原；并进一步验证不同HBV特异性CD8+ T细胞对HBV-HCC的不同杀伤作用，为HBV-HCC过继T细胞疗法及相关后续研究提供依据。

背景 .肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是目前全球肿瘤相关死亡的第三位致死肿瘤,且全球每年仍有超过 50 万新发病例。HCC同乙型肝炎病毒(HBV)密切相关。HBV感染后不仅可以引起急慢性肝炎，还可以引起肝硬化及最终引起HCC。我国HCC中HBV阳性率高达80%。因此如何有效防治HBV及HBV相关 HCC是当前的研究热点和难点。.主要研究内容.1．分析手术切除的HCC合并门静脉癌栓患者临床特点；.2. 探讨单中心百克钳辅助肝切除的长期应用效果； .3. 进行肝癌原代细胞培养及肝癌免疫研究； .4. 对Long non-coding RNA GAS5在HBV相关HCC中的作用进行研究，并对其同HBV病毒X基因的关系进行探索。.重要结果.1. HCC合并门静脉癌栓及非门静脉癌栓组多发肿瘤例数分别为60%及20%，差异显著，重大并发症发生率为1例(10%)及0例(O%)，无术后3月内死亡；.2. 早期晚期组均无围手术期死亡，并发症发生率无统计学差异(P>0.05)；.3. 新鲜肝癌组织可进行体外分离培养。外周血单核细胞提取后可进行T细胞激活实验；.4.初步数据提示在HCC中HBV病毒X基因含量增加，而GAS5含量减少。接下来实验阐明了HBV病毒X基因通过促进甲基转移酶的表达来诱导GAS5的DNA甲基化，从而抑制GAS5的表达。此外，GAS5与YBX1结合，促进YBX1及其下游靶p21的表达；.关键数据及科学意义.1. 巨大HCC合并门静脉癌栓行手术治疗有安全保障；术前多发肿瘤可能是巨大HCC合并门静脉癌栓的高危因素之一。.2. 百克钳辅助肝切除是一种安全可靠的肝切除方法。.3. 肝癌免疫相关问题需要进一步深入研究，为下一步实验指明方向。.4. HBV病毒X基因通过诱导GAS5甲基化降低其表达促进肝细胞肝癌进展。