肝窦内皮细胞中NOD1激活促进HBV特异性T细胞应答的机制

The innate immune system of liver and HBV-specific T cell response play an indispensable role in HBV clearance. The role of intrahepatic NOD1 receptors in HBV infection is unclear. Our preliminary results suggest that intrahepatic NOD1 activation promotes HBV clearance and upregulation of intrahepatic T cell markers and IL-2 expression. The activation of the liver sinusoidal endothelial cells (LSEC) has antigen cross-presenting ability and IL-2 can promote T cell differentiation and maturation through the third signal. Accordingly, we hypothesize that activation of NOD1 in LSEC promotes the differentiation and maturation of HBV-specific T cells through IL-2-JAK-STAT5 signaling. We used the chronic HBV replication mouse model, primary LSEC and T cell function analysis to show that activation of NOD1 in LSEC resulted in activation and enhancement of LSEC antigen presentation capacity, that LSEC secreted IL-2 after activation, then induced IL-2-JAK-STAT5 Signal to promote HBV-specific T cell differentiation and maturation, and that functional HBV-specific T cells cleared HBV. From the new perspective of NOD1 receptor, this project is expected to clarify that NOD1 activation in LSEC induced T cell differentiation and maturation to clear HBV, and to provide new ideas of prevention and treatment for chronic HBV infection in the immune tolerance phase.

肝内天然免疫与HBV特异性T细胞应答对HBV清除起重要作用。然而，对肝内NOD1受体在HBV感染中作用尚不清楚。我们预实验结果提示肝内NOD1激活促进HBV清除，肝内T细胞标志物与IL-2表达上调。肝窦内皮细胞（LSEC）激活后具有抗原交叉提呈能力，以及IL-2能通过第三信号促进T细胞分化成熟。据此，我们认为：LSEC中NOD1激活通过IL-2-JAK-STAT5信号促进HBV特异性T细胞分化成熟。我们利用慢性HBV复制小鼠模型、原代LSEC和T细胞功能分析，阐明LSEC中NOD1激活促使LSEC抗原提呈能力激活与增强；LSEC激活后分泌IL-2，依次激活IL-2-JAK-STAT5信号，促进HBV特异性T细胞分化成熟；功能性HBV特异性T细胞清除HBV。本研究从NOD1这个新视点探讨LSEC中NOD1刺激后诱导T细胞分化成熟而清除HBV机制，为免疫耐受期慢性HBV感染防治提供新思路。

肝内天然免疫与HBV特异性T细胞应答对HBV清除起重要作用。然而，对肝内NLR（NOD样受体）在HBV感染中作用尚不清楚。本研究中，我们主要探讨了NOD2配体MDP处理小鼠后，小鼠体内HBV病毒学指标的改变，并探究了肝内免疫细胞和分子的改变与病毒学改变之间的相关性。考虑到NLR（NOD样受体）在细菌感染后活化，我们还探索了临床上乙肝患者肠道菌群与肝损伤程度、肝病进程的相关性。.实验方法和研究结果: 通过高压尾静脉注射6μg pAAV/HBV1.2质粒建立慢性HBV复制小鼠模型。在HBV质粒注射后第14天，同样以高压尾静脉注射的方式将NOD2配体导入肝脏。我们发现MDP处理延缓慢性HBV复制小鼠体内病毒清除；而慢性HBV复制小鼠血清内和肝内HBV复制和表达的增强有赖于肝内趋化因子水平的降低以及IL-6/IL-10 比例的倒置；MDP处理小鼠在day10、day30肝内CD4+ T淋巴细胞以及CD8+ T淋巴细胞内因子（TNF-α、IL-2、IFN-γ）染色均无明显变化。肝细胞、KCs和NK细胞表达粘附分子CD54和PD-L1水平上调。另外，通过高通量 16S rDNA 测序确定了 91 名 HBV-ACLF 患者（109 份粪便样本）粪便微生物组的变化，其中包括 9 名处于 HBV-ACLF 不同阶段的患者。我们的研究显示:随着HBV-ACLF的进展，肠道微生物组的多样性和丰度显着降低。拟杆菌的相对丰度与健康对照组相比，HBV-ACLF 组微生物组中的门显着减少，而潜在致病菌(如韦隆氏菌、链球菌、肠球菌和克雷伯氏菌)的丰度增高。拟杆菌 属丰度与血清甲胎蛋白水平呈负相关，韦洛氏菌属丰度与血清总胆红素(TBIL)呈正相 关。此外，粪球菌属的丰度显着与血清 TBIL 水平和国际标准化比值呈负相关，与凝血酶原时间活性呈正相关。.结论: MDP处理延缓慢性HBV复制小鼠体内 HBV清除主要机制不依赖于肝内T细胞应答，而依赖于肝内抗原提呈细胞（肝细胞、 KCs）PD-L1和NK细胞PD-1的表达上调。肠道菌群在 HBV-ACLF 的发展中起 着重要作用，也为进一步研究细菌感染在HBV-ACLF进程中的作用机制奠定了理论基础。