多基源藏药蒂达的质量等同性研究及其DNA条形码识别系统的构建

Abstract: The botanical origins of Tibetan medicine Dida is in varieties and it leads to many problems in utility. The main active constituents (anti-liver, gallbladder diseases) of six species usually used of multi-origin Tibetan medicine Dida were analyzed by the standards of the specie of Qiyedan regulated in Chinese Pharmacopoeia and researching technology of multi-disciplinary such as pharmaceutical analysis, pharmacodynamics, molecular biology, etc; chemical fingerprint chromatograms were set up through HPLC-MS, and the equality and difference of its active and characteristics ingredients were compared. Its anti-liver damage and cholagogic pharmacodynamics of in vitro and in vivo were compared, and pharmacodynamics equivalence and difference of multi-origin Dida were illustrated. Comparative Study on its heredity and genetic relationships were carried out and its bar code recognition system was developed by using DNA molecular markers techniques based on PCR...Sense: the equality of the main active and characteristics ingredients, traditional functions and so on of the six species usually used of multi-origin Dida were illustrated through upwards research, and its bar code recognition system was established. So it provided the scientific evidences for enlarging the resource utility and establishing the related drug quality standard.

摘要：藏药"蒂达"基原复杂，应用混乱。本课题采用药物分析、药效学、分子生物学等多学科研究技术，以药典收载种青叶胆为标准，对多基原藏药"蒂达"主要应用的6个种的主要活性成分（抗肝、胆疾病）进行含量分析；利用HPLC-MS建立化学指纹图谱，对其作有效成分和特征性成分的等同性和差异性比较。对藏药"蒂达"的主要应用的6个种进行抗肝损伤、利胆的体内和体外药效学比较研究，阐明多基原"蒂达"在药效上的等同性和差异性。利用PCR为基础的DNA分子标记技术，进行6个种的生物遗传和亲缘关系的比较研究，构建DNA条形码识别系统。.意义：通过以上研究，阐明多基原藏药"蒂达"主要应用的6个种在主要活性成分、特征性成分、传统功效、药效学等方面的等同性，同时构建其DNA条形码识别系统，为扩大资源及建立相应的药品质量标准提供科学依据。

藏药“蒂达”基原复杂，基原植物涉及龙胆科獐牙菜属Swertia、花锚属Halenia、虎耳草科虎耳草属Saxifraga等7科14属80余种植物，其在云南、四川、西藏等地应用混乱。. 本项目对藏药“蒂达”基原植物中7种有效成分（抗肝、胆疾病）进行含量分析，并进行整合评控。结果表明藏药“蒂达”基原植物中绝大多数含有这7种有效成分，但种间差异较大，通过化学品质综合指数进行整合评控对质量控制有参考价值。建立并比较藏药“蒂达”的高效液相色谱指纹图谱，各物种所含化学成分既有一定的相似性，也存在一定差异，该方法可作为其鉴别及质量控制依据。. 对藏药“蒂达”的主要应用的6个种(青叶胆、紫红獐牙菜、印度獐牙菜、川西獐牙菜、椭圆叶花锚和唐古特虎耳草）进行抗肝损伤、利胆的体内和体外药效学比较，阐明多基原“蒂达”在药效上的等同性和差异性。结果表明其能极显著降低CC14肝损伤小鼠血清中的ALT、AST，对总蛋白含量影响不明显，能够抑制肝损伤引起的肝脏肿大，改善肝脏组织病理损伤，并能促进正常大鼠胆汁流量的分泌，同时影响大鼠胆汁中其他成分的分泌，有利胆作用。体外研究显示：在一定浓度范围内的6种基源植物对肝细胞没有毒性，且不同浓度的药物对细胞生长具有一定的促进作用，均能够抑制CC14引起的肝细胞上清液中ALT、AST、MDA含量的升高，提高细胞SOD活力。. 对多条DNA条形码候选序列进行评价，筛选出适合藏药“蒂达”基原植物物种鉴定的DNA序列，进行多物种的生物遗传和亲缘关系的比较研究，构建DNA条形码识别系统。结果表明ITS序列变异位点丰富、鉴别能力高、序列长度适宜，建立基于ITS序列的DNA条形码识别系统，可准确鉴定多基原藏药“蒂达”物种。.利用ISSR方法对藏药“蒂达”原植物进行遗传多样性分析，同时对其进行分子水平方向的鉴定。ISSR分子标记能对藏药“蒂达”原植物从分子水平进行快速鉴别，从其的种内遗传相似系数及聚类图可以看出，来源于同一地区不同居群遗传一致度较高。. 本工作为藏药“蒂达”基原植物鉴定，药物分析与质量控制、药效学等同行差异性、分子生药学研究等提供基础资料，并为多基原药用植物鉴定研究提供借鉴和参考。