DNA条形码技术在藏药洪连基原鉴定及成药质量控制中的应用研究

DNA barcode technology is a newly developed way to identify species rapidly and accurately based on specific DNA fragments on the molecular level. Lagotidis Herba (also called Tibetan rhizoma coptidis or Short spike Lagotis) is one of the most common used Tibetan medicinal herbs. Currently the medicinal herb named “Lagotidis Herba” found in the medicine market is actually a collection of many kinds of species belong to Scrpophulariaceae Lagotis，the word of “Lagotidis Herba” appeared in Pharmacopoeia and Pharmacognography means at least nine plant species, but their pharmacological activities are not exactly the same, they are very easy to be mistaken and the clinic effects are affected. What’s more, there are many kinds of Tibetan patent drugs containing Lagotidis Herba, and there are different pharmaceutical factories that produce the same Tibetan patent drug. The identification of the species of Lagotidis Herba in the Tibetan patent drugs is one of the key procedures for the quality control of the patent drugs. The aim of our study is to establish a rapid, accurate and standard method to identify the species of Lagotidis Herba in the medicinal material and Tibetan patent drugs based on the specific DNA barcode. The result of our research can be used to guide the rapid and accurate identification of Tibetan medicinal herb Lagotidis Herba and the quality control during its production, and this method also can be used for other Tibetan medicinal herbs. Our study will lay the foundation for the modernization, standardization and globalization of the Tibetan medicinal herbs and patent drugs.

DNA条形码（DNA barcode）技术是新近发展起来的一种通过特异性DNA片段对物种在分子水平上进行鉴定的方法。洪连（又叫藏黄连、兔耳草等）是藏药习用药材之一，使用范围广，用量大。目前市场上称为“洪连”的药材其实是玄参科兔耳草属下的多种植物的统称，现有的药典和药物志中收录的“洪连”包含至少9种植物。它们的药理活性不完全相同，使用时极易误用而影响疗效。此外，含有洪连的藏成药种类较多，同一种藏成药的生产厂家也很多，对藏成药中的洪连进行准确的种类鉴定是成药质量控制的关键步骤之一。本研究的目的在于建立一种快速、准确、基于DNA条形码序列的鉴定药材和成药中洪连种类的标准化方法。研究成果可用于指导藏药材洪连的鉴定以及藏药生产中的质量控制，并可以推广运用到藏药其他品种。本研究可为藏医药的现代化、标准化发展，走向世界打基础。

DNA条形码（DNA barcode）技术是一种通过特异性DNA片段对物种在分子水平上进行鉴定的方法。在藏药中，使用同属其他药材作为替代或者混合多种入药的情况较为常见，存在实际用药与药典标准差距较大的情况。洪连又称兔耳草，是玄参科兔耳草属下的多种植物的统称，不同药典中记录的兔耳草有9种，我国记载的兔耳草有17种。兔耳草在藏药中用量大，使用范围较广，.本项目拟利用DNA条形码技术对含有兔耳草的藏成药中的兔耳草的种类进行鉴定。本项目使用6对引物（trnL、matK、trnGS、psbA、rps和ITS），从含有兔耳草的藏成药中扩增DNA条形码，鉴定药品中兔耳草的种类。.我们的研究结果如下：（1）即使药材在成药过程中经过复杂的加工，在藏成药中依然可以提取到一定长度片段的DNA。（2）从藏成药中提取的DNA可以满足普通PCR的要求，并能扩增出符合预期大小的DNA条带。（3）我们使用多重巢式PCR技术对来自藏成药的DNA进行扩增。在6对引物中，其中的3对引物（trnL、matK、trnGS）工作效果较好，可以扩增出条带并成功测序，能够比对出兔耳草的种类，成功率分别为84.4%、93.8%和84.4%，但psbA、rps和ITS这三对引物效果很差，虽然能扩增出条带，但测序成功率只有3%、0%和3%，基本上等同于失败，无法给出有效的序列信息。因此综合起来说，我们只能遗憾的承认，我们无法准确鉴别藏成药中的兔耳草的种类。（4）目前见于公开发表的文献中通过DNA条形码对药材的鉴定，基本上都是对成药前药材种类的鉴定，而在成药中对使用的药材种类进行鉴定，本研究可能是尚属首次。虽然本次鉴定成药中兔耳草种类的尝试没有成功，但本方法可以用在对成药中其他药材的种类鉴定，这对于药材的标准化和规范化建设具有重要意义。