载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白抗炎机制的研究

大量研究显示炎症反应在动脉硬化等多种疾病的发生过程中发挥重要作用。前期工作表明申请者课题组构建的载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体与脂质结合、促胆固醇外流及抗氧化等功能各不相同；动物实验也显示突变体rHDL74、rHDL52比野生型rHDLwt有更强的抗炎能力，而rHDL228却加剧炎症，其机制尚未明确。本研究拟在此基础上(1)进一步检测突变体rHDL74、rHDL52、rHDL228对其他炎症因子的影响(2)利用基因芯片对肺组织进行全基因扫描,分析三种rHDL调控机制的差异(3)细胞水平western blot及流式细胞仪分别检测三种rHDL对LPS诱导的炎症通路中关键激酶及重要调控因子的影响(4)荧光定量PCR及western blot检测其对抗炎因子TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3表达水平影响。该研究将对建立治疗动脉粥样硬化等炎症性疾病的新方法提供理论依据,也为治疗败血症开辟新途径

课题组按照项目计划书进行了相关研究，较为圆满的完成了该项目。目前发表SCI文章（标注资助）2篇，中华级论文（标注资助）1篇。我们研究结果显示，rHDL74与rHDL228之所以具有不同的抗炎能力，这与其影响炎症因子表达水平，及相关炎症信号通路的激活密不可分。rHDL74能显著的降低炎症相关因子CRP、CD14以及MCP-1的表达水平，并能显著抑制炎症信号通路NF-kB, JNK 及 p38的激活，与之相反，rHDL228则能提高炎症相关因子的表达水平，并加剧了炎症信号通路NF-kB及ERK的激活。在本研究中，我们分别在细胞及动物两个水平上研究载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白抗炎的可能机制，动物水平：我们以应用LPS诱导炎症小鼠模型为基础，予以载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体干预，结果显示：LPS尾静脉注射24h后，经rHDL74治疗的小鼠的CRP水平显著降低(P<0.01 vs. rHDLwt; P<0.01 vs. LPS) MCP-1 (P<0.05 vs.rHDLwt; P<0.01 vs. LPS) 、CD14 (P<0.01 vs. LPS)；同时，免疫组化分析显示，rHDL74干预12h及24h后，能显著降低炎症信号通路的NFkB的激活，而而rHDL228则加剧了NFkB的激活。细胞水平：我们应用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症细胞模型，分别予以载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白干预，结果显示：RAW264.7炎症细胞模型经rHDL74干预12h及24h后，能显著降低炎症信号通路的JNK以及p38，而rHDL228则加剧了ERK信号通路的激活。总之，我们研究显示，rHDL74通过降低炎症因子的表达水平及抑制炎症信号通路NF-κB, JNK, p38的激活来发挥其抗炎能力，而rHDL228则通过升高炎症因子表达水平及加剧炎症信号通路NF-κB和ERK的来实现其促炎作用。