PRRSV经ADE感染逃逸抗病毒免疫的分子机制

PRRSV-ADE感染经FcγRIIB特异性抗体封闭的PAM，应用TLR活化剂LPS或poly(I:C)或R837刺激感染细胞，ELISA及荧光定量PCR分别检测IFN-α/β和TNF-α的产生；使用siRNA干扰沉默PAM中SHIP1的表达，经PRRSV感染，应用LPS或poly(I:C)或R837刺激感染细胞，同样的方法检测IFN-α/β和TNF-α的产生。构建PRRSV GP5蛋白及TRIF、MyD88因子的表达质粒，将GP5与MyD88或TRIF的表达质粒共转染PK15，分别应用LPS和poly(I:C)刺激转染细胞，荧光素酶报告系统检测MyD88与TRIF的表达，同样的方法检测IFN-α/β和TNF-α的产生。明确病毒抗体复合物或病毒蛋白经FcγRIIB2受体或SHIP1负调控分子参与TLR信号通路的负向调节作用。这初步揭示了PRRSV经ADE感染逃逸抗病毒免疫的分子机制。

PRRSV经ADE感染逃逸机体的抗病毒免疫反应，主要是通过IgG Fc受体(FcγR)、病毒受体、病毒蛋白以及细胞内负调控分子等共同介导。本课题通过探讨PRRSV经ADE感染逃逸抗病毒免疫反应的分子机制，为该病的防治和新型疫苗研发奠定基础。通过研究猪繁殖与呼吸综合征病毒经ADE途径进入细胞过程中FcγR的作用，发现激活型受体的活化能增强巨嗜细胞的吞噬作用，促进病毒的进入，同时能抑制细胞内抗病毒因子的水平，增强病毒在细胞内复制，而抑制型受体的活化能抑制巨嗜细胞的吞噬作用，抑制病毒的进入，同时能增强细胞内抗病毒因子的水平，抑制病毒在细胞内复制。我们研究发现非特异性抗体也能通过与激活型受体结合促进病毒在细胞内增殖，而非感染性免疫复合物也能通过与FcγR结合，增强病毒在细胞内复制水平。感染性复合物可通过抑制细胞内抗病毒因子水平等机制增强病毒在细胞内复制水平。通过研究猪繁殖与呼吸综合征病毒经ADE途径进入细胞过程中病毒受体CD163胞外区及其功能结构域的作用，发现CD163胞外区及其功能结构域SRCR5-6可能参与PRRSV-IgG在细胞内的复制增殖，而CD163-P4（SRCR7-9）也可能发挥一定的作用。通过研究pSn受体胞外区结构域在PRRSV和PRRSV-ADE感染中作用，发现各段结构域封闭后对病毒增殖的抑制作用不一。Sn N段封闭后，病毒略有抑制作用但差异不显著，17个结构域中第9、10、13段结构域抑制作用较明显；结构域联合封闭后对病毒的抑制作用显著，说明唾液酸结构的完整性对病毒感染更重要，单独封闭的结构域部分也有抑制作用，暗示这部分结构域可能有其特有的功能，可能与病毒的粘附有关。同时研究表明Sn可以在一定程度上调节感染性免疫复合物对机体的作用，Sn受体和CD163分子在感染性免疫复合物进入宿主靶细胞时具有协助和促进作用。通过探究SHP1在PRRSV诱导的抗病毒免疫中的作用，发现激活的SHP1对PRRSV感染后PAM中IRF7、NF-kB、IFN-β的转录有促进作用，对IRF3和TRAF6的转录有抑制作用。通过研究pcDNA-GP5及其缺失ITIM序列的pcDNA-GP5△229-246转染Marc145细胞中SHP-1、SHP-2 、IFN-β、NF-κB mRNA转录水平的影响，发现GP5蛋白的ITIM基序对IFN-β的作用有一定的时间限制。