PRRSV通过MHC II引起MoDCs免疫应答的分子机制初探

Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRSV) could induce complex immune response in swine. Dendritic cells (DCs) are potent antigen-presenting cells (APCs), which can capture antigen and interact with major histocompatibility complex (MHC) to form MHC antigenic peptide complexes, present the composite to prime naive T cells, then induce immune responses. In this study, the changes of immature MHC II and mature MHC II during PRRSV infection will be analyzed by Western blotting, FACS and IFA, which is intended to explain the effect of PRRSV infection on the maturation of MHC II in MoDCs. PRRSV encoded proteins improving MHC II expression will be further screened by expressing the PRRSV proteins in eukaryotic expression vector. Next, a recombinant adeno-associated viruses based PRRSV encoded protein screened (rAAV/PRRSV) will be constructed, the proliferation of CD4+ T cells stimulated by rAAV/PRRSV infected MoDCs will be analyzed. This study will explore the molecular mechanism of immune response induced by PRRSV through MHC II and provide new ideas and perspectives for the study of PRRSV immune in the future.

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染猪体能够引起复杂的免疫应答。树突状细胞（DCs）是功能最强的抗原递呈细胞（APCs），DCs将捕获的抗原与MHC分子作用形成MHC抗原复合物，递呈给初始型T细胞，引发免疫反应。本项目以MoDCs为研究对象，采用Western blotting、FACS、IFA等方法对PRRSV感染MoDCs过程中未成熟及成熟MHC II的变化进行分析，旨在阐述PRRSV感染对MoDCs中MHC II成熟过程的影响；进一步构建真核表达质粒，筛选影响MHC II表达的PRRSV编码蛋白；根据筛选的PRRSV编码蛋白，构建重组腺相关病毒（rAAV/PRRSV），感染MoDCs，研究rAAV/PRRSV感染后的MoDCs对CD4+ T细胞的活化作用。本项目初探PRRSV增强MHC II表达引起MoDCs免疫应答的分子机制，为PRRSV免疫应答的研究提供新的思路和视角。

1.项目背景：猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRSV）感染机体后，往往引起免疫抑制，这种免疫抑制多是PRRSV通过影响巨噬细胞和树突状细胞（Dendritic cells, DCs）中细胞因子的表达和调控相关抗原的递呈产生的。前期研究表明：PRRSV感染MoDCs后能够引起免疫细胞中SLA II类基因编码蛋白SLA-DR表达量的变化，但产生此现象的分子机制尚未见报道，本项目拟对产生此变化的分子机制进行探究。2.主要研究内容 。2.1检测高致病性PRRSV（HP-PRRSV）感染对MoDCs中未成熟MHC II（iMHC II）和成熟MHC II（mMHC II）表达的影响。HP-PRRSV SD-JN株分别以不同接毒量孵育MoDCs不同时间，Western blotting，FACS及IFA的方法检测PRRSV感染对MoDCs中iMHC II和mMHC II表达的影响。 2.2筛选引起SLA-DR表达变化的PRRSV的关键编码蛋白。构建表达PRRSV编码蛋白的真核表达质粒，转染PAM细胞，筛选引起SLA-DR 表达变化的PRRSV关键编码蛋白。2.3探索2.2中筛选到的PRRSV关键编码蛋白影响免疫细胞中SLA-DR表达的分子机制。3.重要结果及关键数据。3.1随着感染时间的增加，PRRSV能够引起MoDCs细胞表面和细胞内CD74和SLA-DR表达量的增高，当接毒量400TCID50，接毒时间为18h时，细胞中CD74和SLA-DR的表达量最高。3.2构建了PRRSV编码蛋白的质粒，筛选结果显示：NSP4能够显著影响免疫细胞总蛋白及表面蛋白的SLA-DR表达的变化。3.3将Nsp4分为Domain I、Domain II和Domain III三部分，结果显示：Nsp4的Domain I对PAM细胞表面SLA-DR的表达有显著影响。本项目为研究PRRSV引起机体免疫抑制的原因提供了一定的理论基础。