禽流感灭活病毒抗原高效诱导鼻腔免疫应答机制的研究

鼻腔是禽流感病毒入侵动物的主要途径，鼻腔免疫后可阻断禽流感病毒进入机体。鼻腔黏膜对灭活禽流感病毒抗原的吸收和树突状细胞有效摄取抗原是限制灭活病毒鼻腔免疫效率的两个主要瓶颈。树突状细胞伸出突起通过上皮细胞连接摄取抗原呈递给淋巴细胞是启动黏膜免疫的关键。因此，本项目主要从促进灭活病毒的吸收和诱导鼻腔黏膜树突状细胞的分化和成熟提高鼻腔局部和全身免疫反应的效率。首先进行树突状细胞的分离和培养，然后建立呼吸道上皮细胞模型calu-3细胞与树突状细胞共同培养体系，研究影响共同培养模型中树突状细胞摄取灭活禽流感病毒的因素，最后应用体外试验（细胞共培养模型）和体内（小鼠和雏鸡）试验一起证明CpG、胆酸钠配合灭活禽流感病毒对树突状细胞分化和成熟、鼻腔局部细胞因子、局部Toll样受体以及局部和全身血清中特异性抗体的影响。本研究结果将为灭活病毒进行鼻腔免疫提供充分的理论依据和预防禽流感发生提供一条简便的免疫途径

鼻腔是禽流感病毒入侵动物的主要途径，鼻腔免疫后可阻断禽流感病毒进入机体。鼻腔黏膜对灭活禽流感病毒抗原的吸收和树突状细胞有效摄取抗原是限制灭活病毒鼻腔免疫效率的两个主要瓶颈。本研究首先确证CpGs配合H9N2禽流感灭活全病毒（H9N2 WIV）鼻腔免疫小鼠和鸡后局部黏膜免疫和系统免疫应答水平。再次，在体外试验中，CpGs配合H9N2 WIV直接与小鼠DCs和鸡DCs（体外诱导培养）相互作用，应用流式细胞术、ELISA试验和混合淋巴细胞反应试验，分别评估DCs的表型成熟、细胞因子表达和促进CD4+ T细胞增殖的能力。最后，在体外建立的DCs/Calu-3上皮细胞共培养模型和体内小鼠鼻腔灌注模型，应用流式细胞术和共聚焦显微镜等方法，探讨CpGs诱导鼻腔黏膜下DCs跨上皮摄取H9N2 WIV并转运至引流淋巴结-颈淋巴结的能力，同时深入研究了DCs招募和树突形成的机制，也阐明了参与此过程的DCs亚型和捕获受体，以期为CpGs作为鼻腔黏膜免疫佐剂的研究和应用提供一定的理论依据。