MMP-2多表位DNA疫苗的抗肿瘤效应和机制的研究

基质金属蛋白酶（MMPs）与肿瘤的发生发展密切相关，但该家族中各成员在不同肿瘤及肿瘤发生发展的不同阶段所表现出的作用并不一致，导致MMPs广谱抑制剂的开发失败。MMP-2的异常表达与多种肿瘤的发生发展存在显著相关性，是重要的抗肿瘤药物潜在靶标之一，然而MMP家族各成员结构的相似性使得MMP-2特异性抑制剂难以设计合成。因此，本项目拟用能够显著增强所插入的抗原表位免疫原性的质粒载体构建并优化特异针对MMP-2的多表位DNA疫苗，以期打破免疫耐受，激发强烈的免疫应答；达到特异阻断MMP-2活性，进而抑制肿瘤发生发展和/或转移的目的，并探讨其抗肿瘤免疫机制。本研究不仅可为现代肿瘤治疗提供DNA疫苗免疫治疗的新思路，而且对于阐明MMP-2多表位DNA疫苗抗肿瘤效应的机制以及MMP-2在肿瘤发生发展及转移过程中的作用有着重要意义。

一、基质金属蛋白酶（MMPs）与肿瘤的发生发展密切相关，但该家族中各成员在不同肿瘤及肿瘤发生发展的不同阶段所表现出的作用并不一致，导致MMPs广谱抑制剂的开发失败。MMP-2的异常表达与多种肿瘤的发生发展存在显著相关性，是重要的抗肿瘤药物潜在靶标之一，然而MMP家族各成员结构的相似性使得MMP-2特异性抑制剂难以设计合成。本项目利用能够显著增强所插入的抗原表位免疫原性的质粒载体设计、构建并制备特异针对MMP-2的多表位DNA疫苗，并用原核系统成功表达制备活性融合蛋白6×His-MMP2。通过动物免疫实验检测DNA疫苗的免疫原性；期望达到特异阻断MMP-2活性，进而抑制肿瘤发生发展的目的，并探讨其抗肿瘤免疫机制。本研究不仅可为现代肿瘤治疗提供DNA疫苗免疫治疗的新思路，而且对于阐明MMP-2多表位DNA疫苗抗肿瘤效应的机制以及MMP-2在肿瘤发生发展及转移过程中的作用有着重要意义。.二、许多感染性疾病，自身免疫性疾病以及肿瘤的诊断都依赖于使用ELISA检测血清中存在的一些特异性抗体，但是许多小分子抗原表位肽难以被固定在检测孔的表面。因此，本实验拟以GnRH为模式肽评估VEGF121是否适合用作抗原表位载体从而可以用于特异性抗体的检测。首先，我们将GnRH的相应核苷酸序列融合在 VEGF121的编码区的 C端，融合蛋白VEGF-GnRH在大肠杆菌E. coli 中高效表达并形成了包涵体。通过分离纯化，我们可以从2.1升培养基中获得235mg 接近均质的融合蛋白。接着，VEGF-GnRH作为抗原可以用于ELISA 和western 印迹。我们的实验结果表明VEGF-GnRH能够用于血清中特异的抗GnRH抗体的定性定量测定。因此， VEGF121 可能是一合格的抗原表位肽的载体，可以用于抗原表位肽抗体检测平台的建立。