电化学生物传感器精准甄别肽类兴奋剂rhEPO/EPO关键核心技术的研究

Recombinant human erythropoietin (rhEPO) is a stimulants that was widely used in sports in recent years. Due to rhEPO and endogenous erythropoietin (EPO) have the same biological activity and molecular structure, can not accurately distinguish between EPO and rhEPO. We self-created an electrochemical biosensor technology platform which allow fast and accurately distinguish rhEPO/EPO Standard samples. We observed that electrode modified film easy to falling off, and there is potential drift phenomenon of the complex clinical specimen’s detection. This study will with our patented technology, the use of sulfhydryl covalent binding method, high specificity of bis-PNA probe connecting peptide direct hybridization of rhEPO/EPO, formation of the stability of the tri molecular complex. Using the characteristics of rhEPO and EPO only slight differences in the charge, solve rhEPO/EPO discriminated critical technology to achieve accurate discriminated of complex clinical specimen’s rhEPO/EPO.

重组人促红细胞生成素(rhEPO)是近年来体育运动中常用的兴奋剂，由于 rhEPO与内源性促红细胞生成素(EPO)具有完全相同的生物活性和基本相同的分子结构，难以快速精确区分。前期研究中我们自主创建了电化学传感器检测技术平台，实现了rhEPO/EPO标准品的快速精确区分，但研究过程中我们发现电极修饰膜不均一、易脱落，检测复杂临床标本时存在电位漂移等现象。本项目中我们拟以我科前期专利技术，利用巯基共价结合法，以高特异性bis-PNA-EPO结合肽探针直接杂交rhEPO/EPO，形成稳定的三分子复合体，利用rhEPO和EPO仅有电荷微小差异的特点，解决rhEPO/EPO甄别关键核心技术，实现复杂临床标本中rhEPO/EPO的精准甄别。

重组人促红细胞生成素(rhEPO)是近年来体育运动中常用的兴奋剂，由于 rhEPO与内源性促红细胞生成素(EPO)具有完全相同的生物活性和基本相同的分子结构，难以快速精确区分。本研究进行了EPO 特异结合肽-探针电化学生物传感器的修饰及表征，建立了rhEPO电化学检测方法、制备了纳米新材料、进行了重复性研究和检测条件优化；进行了EPO 特异结合肽-探针电极固定、探针浓度的优化、探针特异性实验、电化学生物传感器的稳定性、灵敏度实验，最佳反应温度及孵育时间的优化等实验；进行了传感器纳米修饰材料的TEM表征及元素分析、传感器纳米修饰材料X射线光电子能谱（XPS）分析、电化学传感器纳米金修饰过程的交流阻抗图谱、传感器的特异性实验结果、传感器的检测临床标本实验结果、传感器与其他检测方法的比较。建立了电化学芯片检测技术，解决了三电极体系修饰膜不均一、易脱落的难题。本研究通过系列实验，建立了rhEPO/EPO甄别关键核心技术，实现复杂临床标本中rhEPO/EPO的精准甄别。创建了电化学传感器检测技术平台，实现了rhEPO/EPO标准品的快速精确区分。