甲基供体影响DNA甲基化及其与乳腺癌发病的关系

DNA 甲基化异常与乳腺癌的发病密切相关，膳食甲基供体是DNA甲基化所需甲基的重要来源。然而甲基供体是否通过引起DNA甲基化异常影响乳腺癌的发病，目前未见研究报道。本项目拟采用病例对照研究设计，选取女性乳腺癌患者和年龄居住地频数匹配的社区女性对照各560人，通过调查既往5年内的膳食习惯，并测定膳食和血中叶酸、胆碱、甜菜碱和蛋氨酸等甲基供体，确定机体甲基供体水平。同时检测甲基代谢相关酶（MTHFR、MTR、MTRR、CHDH和BHMT）基因多态性、全基因组DNA甲基化水平和乳腺癌特异性抑癌基因BRCA1基因启动子区CpG岛的甲基化水平，进一步分析在不同DNA甲基化水平下，甲基供体和甲基代谢相关酶基因多态性对乳腺癌的作用，明确甲基供体对乳腺癌发病的影响及其作用机制，阐明DNA甲基化在其中所起的作用。研究结果将有助于进一步明晰乳腺癌的发病机理，并为从饮食途径预防乳腺癌提供充分的科学依据。

研究对象和方法：本项目采用病例对照研究设计，共招募新发的女性乳腺癌病例和按照年龄频数匹配的对照各693 例，在对象招募上问卷调查人数病例和对照各超过计划133例。采用面对面询问的方式收集了研究对象既往的习惯性膳食摄入情况，采用高效液相色谱-串联质谱法检测了研究对象血清胆碱和甜菜碱水平。采用改良多重链接酶检测法（improved multiplex ligation detection reaction technique, iMLDRTM）对甲基代谢相关酶基因的8个位点（MTHFR 基因rs1801131、MTHFR 基因rs1801133、MTRR 基因rs162036、MTRR 基因rs1801394、MTR 基因rs1805087、CHDH 基因rs9001、BHMT基因rs3733890和PEMT基因rs7946）进行了SNP分型，成功检测基因者包括570例病例和576例对照。采用MethylFlash Methylated DNA Quantification Kit检测了研究对象DNA甲基化水平。..主要结果：本研究结果发现，膳食甲基供体（叶酸、胆碱和甜菜碱）、膳食中各类胆碱（游离胆碱、甘油磷酰胆碱、磷酸胆碱、磷脂酰胆碱和鞘磷脂胆碱）、血清游离胆碱和甜菜碱与乳腺癌的发病呈负相关。除MTRR rs162036变异型纯合子GG可以降低乳腺癌的发病风险外，其它甲基代谢相关酶基因多态性位点与乳腺癌发病无显著关联。膳食甲基供体与甲基代谢相关酶基因多态性对乳腺癌的交互作用结果显示，叶酸摄入与 MTHFR rs1801133 之间存在对乳腺癌的交互作用。胆碱摄入与BHMT rs3733890以及PEMT rs7946之间、甜菜碱摄入与PEMT rs7946以及CHDH rs9001之间存在对乳腺癌的交互作用。而胆碱摄入与CHDH rs9001、甜菜碱摄入与BHMT rs3733890之间对乳腺癌不存在交互作用。初步分析发现，DNA甲基化水平在乳腺癌病例组和对照组的差异无统计学意义。..研究成果：本项目以第一作者和/或通讯作者共发表研究论文5篇，其中SCI论文3篇，培养硕士研究生2名，在读硕士研究生2名，1人次出国参加国际学术会议研讨会。.