单核苷酸多态性影响DcR3基因在食管鳞癌中高表达的机制研究

TNFR超家族成员DcR3通过竞争性结合阻断FasL、LIGHT和TL1A所介导的凋亡是肿瘤细胞逃避机体免疫监视和杀伤的一个重要机制。我们前期研究发现食管鳞癌（ESCC）组织中DcR3表达丰度显著高于附近正常组织，并与肿瘤的侵袭和转移显著相关；通过SNP关联研究，我们从群体水平和流行病学角度首次证实了DcR3基因内rs2257440位点的多态性与ESCC发病风险相关。分析显示，与ESCC关联的该位点最可能是影响DcR3等位特异性表达的调控性单核苷酸多态性(rSNP)功能位点。本研究拟采用荧光素酶报告基因试验、位点特异性RNA干扰、EMSA、ChIP等手段，证实该SNP位点的等位特异性顺式调控作用，并观察该位点C/T等位变异对ESCC细胞的DcR3表达量和细胞分化与凋亡的影响，以期深入认识DcR3基因rSNP在ESCC发生发展中的作用，为 ESCC发病机制研究及其早期诊断和防治提供新的思路。

前期研究发现食管鳞癌（ESCC）组织中 DcR3 表达显著高于附近正常组织，并与肿瘤的侵袭和转移显著相关。 SNP 关联研究从群体水平和流行病学角度首次证实了DcR3 基因内 rs2257440 T>C多态性位点与 ESCC 发病风险相关，C等位基因增加了疾病风险。组织学，流行病学及生物信息学分析结果均提示与ESCC 关联的该位点最可能是影响DcR3等位特异性表达的调控性rSNP功能位点。. 在rs2257440T>C功能研究中：（一）生物信息学分析提示转录因子MTF-1可与该位点结合，不同等位基因与其结合能力不同；（二）荧光素酶报告基因提示MTF-1对T等位基因的转录激活能力明显高于C等位基因，提示该SNP可影响其调控基因的产物量；（三）采用食管癌细胞株KYSE450(rs2257440为CT基因型)及EC109(rs2257440位点为CC基因型) 作为细胞模型，过表达MTF-1，CT基因型的KYSE450细胞DcR3显著上调，但是不能上调CC基因型的EC109细胞株DcR3表达，同时Chip结果证实了二者MTF-1与T等位基因的结合。证实了rs2257440T>C对DcR3具有调控作用，其途径是通过MTF-1进行特异性调控；（四）SNP功能结果与前期流行病学结果不一致，我们考虑该区域存在SNP-SNP相互作用，进而行了相关研究，报告基因结果证实与rs2257440T>C相临近的rs2297441(A/G)位点可以影响报告基因产物结果。（五）生物学功能研究中证实了转录因子MTF-1能影响食管癌细胞的生长、凋亡、周期、迁移等生物学功能，并且其功能影响具有rs2257440T>C等位基因差异性。. 以上研究结果证实了rs2257440T>C参与了的DcR3功能调控，但其等位基因对应的细胞学功能与流行病学结果不一致，SNP-SNP相互作用是影响结果差异的一个重要影响因素，扩展了我们对DcR3区域多态性功能位点参与食管癌机制的认识。. 此外发现另一个重要的转录因子C/EBPβ在食管鳞癌组织中的表达及其与淋巴结转移相关，而且miR-203及miR-146b是其潜在靶点，机制研究表明其共同参与了食管癌细胞EMT、迁移和侵袭，进而扩展了C/EBPβ与miRNA参与试管癌的机制认识。