单核苷酸多态性影响eNOS基因在开角型青光眼中低表达的机制研究

eNOS plays an important role in pathogenesis of glaucoma. In our previous study, We first identified that the polymorphism of rs11771443 may be genetic marks of POAG in the Han Chinese population. Bioinformatics analysis show that the rs11771443 may be the functionality.So we could suppose that rs11771443 is the mononucleotide SNP functional position which could regulate the eNOS specificity expression. In present study, we would like to confirm the function of this SNP on isoloci specificity cis on the eNOS expression, transcription and so on by luciferase reporter gene, RNA interference and ChIP. We also detect rs11771443 genetic polymorphisms on the ocular circulation in vivo. Our project could determine the effect of rs11771443 genetic polymorphisms in the pathogenesis of POAG in further, so that it could bring new idea on the study of POAG pathogenesis and early diagnosis or prevention and cure.

eNOS催化合成的NO在青光眼疾病的发生发展过程中起非常重要的作用。我们前期通过SNP病例对照研究从群体水平和流行病学角度首次证实了eNOS基因rs11771443位点多态性与中国汉族人开角型青光眼（POAG）发病风险相关；生物信息学分析显示，该位点可能是功能性SNP位点，并参与eNOS等位特异性表达的调控。本研究拟采取荧光素酶报告基因实验、位点特异性RNA干扰、ChIP等手段，证实该rs11771443位点等位特异性顺式调控作用；同时观察该位点不同等位基因对小梁网细胞eNOS表达量、转录活性影响以及对小梁网细胞形态结构的影响。以期深入认识eNOS基因rs11771443位点多态性在POAG发生发展中的作用，为POAG发病机制研究及其早期诊断和防治提供新的思路。

目的: 研究内皮型一氧化氮合酶（eNOS，NOS3）影响小梁网流出通道的机制.方法：采取三组siRNA转染来抑制NOS3基因在人小梁网细胞中的表达，然后设立siRNA转染组和阴性对照组，通过PCR、Western-blot分别检测NOS3的mRNA和蛋白表达以及COL4A1与fibronectin 1的表达水平、在小梁网细胞培养上清液中进行NOS3的含量检测；通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果：进行siRNA转染干扰组与阴性对照组相比较，转染干扰组的NOS3基因的mRNA表达水平明显下降，类似的结果， NOS3蛋白水平和fibronectin1 、COL4A1的表达水平也明显下降；siRNA组细胞与对照细胞相比，S期细胞减少，G2期细胞增多；在siRNA转染干扰组凋亡细胞数明显高于对照组。.结论：异常NOS3的表达可以使细胞外基质成分的蛋白水平受到严重影响，干扰NOS3可以降低Fibronectin 1和COL4A1在基因水平和蛋白水平上的表达，导致小梁网细胞G2/M期阻滞，并使细胞出现一定程度的凋亡。