鼻咽癌辐射抗拒差异miRNA相关蛋白与细胞周期的功能网络及其调控

辐射抗拒严重影响鼻咽癌(NPC)放疗疗效，制约其分子机制阐明的主要瓶颈为研究角度局限和研究模型缺陷等。在国家等基金资助下，我们成功构建较理想细胞对比模型，并纵观NPC辐射抗拒机制全貌，发现NPC辐射抗拒CNE-2R细胞G1期阻滞，表达差异miRNA和蛋白点为8和11个；信息学分析表达差异miR与差异蛋白能相互结合；且与其他肿瘤辐射抗拒相关，故提出"miR调控细胞周期功能网络介导NPC辐射抗拒" 假设。本项目拟构建表达差异miR和14-3-3报告系统，采用miR增强或抑制试验筛选和鉴定调控14-3-3蛋白的miR，通过PCR array、共聚焦显微镜和[35S]蛋氨酸掺入法等分析miR对14-3-3 mRNA翻译及胞内定位和信号通路及其靶细胞周期的影响，旨在获得验证假设的证据，挖掘评价辐射抗拒的灵敏指标，确立逆转辐射抗拒新靶点。这对于解决NPC辐射抗拒分子机制问题，具有重要战略意义。

本项目总体上完成合同规定的研究内容,且某些方面超额完成。我们已筛查和鉴定同源不同辐射抗拒NPC细胞CNE2R/CNE2间差异表达的miR、蛋白和cDNA，结果发现差异表达较显著的miR为miR-205和miR-24,差异表达较显著的蛋白为PTEN和Jab1;确证差异表达miR-205可通过其 5’末 端“种子序列”直接靶向抑癌基因PTEN 3’末端非编码区(3′-untranslated region, 3‘-UTR)一段保守序列降解PTEN mRNA,激活PI3K/AKT通路,干预细胞凋亡而介导NPC辐 射抗拒; 探索差异表达的蛋白Jab1在NPC放化疗抗拒中的作用及其机制,确证Jab1负调控p27影响放化（如姜黄素衍生物、顺铂等）疗诱导凋亡的速率和DAN损伤与修复，介导NPC的放化疗抵抗。本研究已发表论文6篇，其中SCI收录论文4篇；培养研究生8名，其中博士5名；获国家专利1项；本研究成果为本课题组获得2014年度国家自然基金委的资助提供良好的前期研究。. 新增部分结果：全基因组甲基化检测发现CNE2R整体甲基化水平比CNE2降低30%,MeDIP-Seq 测序法检测发现CNE2R与CNE2之间6个功能元件区域显著差异甲基化;IR可致CNE2R miR-24-1启动子高甲基化,miR-24表达降低,S期细胞增多,细 胞凋亡减少,细胞克隆增多,提示miR-24-1启动子的高甲基化下调miR-24而干预细胞周期分布和凋亡速率介导NPC辐射抗拒;筛查和鉴定不同源不同辐射抗拒鼻咽癌细胞CNE1/ CNE2间差异表达的cDNA；不同辐射抗拒鼻咽癌细胞株遗传学差异的研究。