鼻咽癌放射抗拒相关分泌蛋白的蛋白组学研究

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is one of the most common malignant tumor in our country especially in Guangxi.Local residual disease recurrence and distant metastasis after radiotherapy are a bottleneck of restricting the efficacy and prognosis. The radiation resist in NPC is an important reason that leading to local recurrence, and distant metastasis. Weaken the radiation resistance of tumor cells to increase the radiation sensitivity may be the key to improve 5-year survival of patients with NPC. Studies have shown that the occurrence of radiation resist is a multi-stage, multiple genes involved in the complex process. Changes in the level of gene will inevitably lead to a large number of secreted proteins change. Therefore, Recognition, and identification of radiation resist related secreted proteins not only help to reveal the molecular mechanism of radiation resist, but it is also possible to find the radiation-sensitive molecular markers and inhibit radio-resistance target , which has important theoretical and clinical value to improve the curative effect of nasopharyngeal carcinoma (NPC). So far, research of the radiation resistance related secreted proteins of nasopharyngeal carcinoma has not been reported. This study was the basis of the preliminary studies on the use of proteomics technology analysis and comparison with the same genetic background, different radiation resistance of secreted proteome between nasopharyngeal carcinoma cells ,and authentication difference secreted protein of interest to found that the predictive value of serum markers to radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma and potential targets for drug treatment.

鼻咽癌（NPC）是我国特别是广西最常见的恶性肿瘤之一，放疗后局部残余病灶复发、远处转移是制约其疗效和预后的瓶颈。辐射抗拒是导致NPC放疗后局部复发、远处转移的重要原因。减弱肿瘤细胞辐射抗性，提高放疗敏感性可能是提高NPC患者5年生存率的关键。研究表明辐射抗拒发生是一种多阶段、多基因参与的复杂过程，其基因水平的变化也必然导致大量分泌性蛋白质的改变。因此，识别、鉴定辐射抗拒相关的分泌蛋白质不仅有助于揭示辐射抗拒发生的分子机理，也有可能发现辐射敏感的分子标志物与抑制辐射抗拒的靶标，对提高鼻咽癌疗效具有重要理论和临床价值。迄今为止，有关鼻咽癌放射抗拒相关分泌蛋白的研究尚未有报导。本研究拟在前期研究的基础上，利用蛋白质组学技术分析比较具有相同遗传背景不同辐射抗性的鼻咽癌细胞间分泌蛋白质组，并对感兴趣的差异分泌蛋白进行验证，以期发现对鼻咽癌辐射敏感性有预测价值的血清标志物及潜在的药物治疗靶点。

放射抗拒是导致鼻咽癌放疗后局部复发、远处转移的重要原因。本研究利用蛋白质组学技术iTRAQ与LC-ESI-MS / MS比较和分析放射抗拒CNE-2R细胞和放射敏感CNE-2细胞的差异分泌蛋白，对于鉴定出的差异显著的蛋白质，以慢病毒沉默、免疫磁珠分选技术处理，采用流式细胞术、CCK-8、克隆形成，transwell、裸鼠模型及ELISA及IHC检测人血清及组织中的蛋白的表达等实验手段，发现：.（1）通过蛋白质组学技术共鉴定出3581差异蛋白质，其中有40个蛋白质在CNE-2R和CNE-2细胞的表达存在显著差异，对其中差异表达较显著的蛋白CD166、QSOX1、cofilin-2进一步行体内、外的功能学验证。.（2）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测发现CD166在人鼻咽癌放射抗拒患者血清的高表达，通过磁珠分选发现CD166 表达阳性的鼻咽癌 CNE-2及CNE-2R细胞对放射更具抗拒性,CD166可作为预测鼻咽癌（NPC）放疗反应的生物标志。沉默CD166基因可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、改变细胞周期分布等增强CNE-2R细胞对放射线的敏感性，提示沉默CD166基很可能是提高鼻咽癌患者放疗敏感性的有效治疗手段之一。.（3）ELISA和免疫组织化学（IHC）检测发现QSOX1蛋白在人鼻咽癌放射抗拒组者血清和组织中的低表达.通过沉默QSOX1在CNE-2细胞中的表达，发现沉默QSOX1能增强CNE-2细胞在射线照射后的存活率，细胞更具有放射抗性，同时抑制细胞的迁移和侵袭能力，可能与细胞受照射后的凋亡率降低有关；类似的结果在裸鼠移植瘤模型中也得以验证。因此，靶向QSOX1将提供一个新的增强鼻咽癌放疗的敏感性的途径。 .（4）ELISA及IHC检测cofilin-2蛋白在人鼻咽癌放射抗拒组者血清和组织中的高表达。通过沉默Cofilin-2在CNE-2R细胞中的表达，发现沉默cofilin-2可抑制射线照射后的CNE-2R细胞的增殖，增强其放射敏感性, 可能与细胞受照射后促进CNE-2R细胞凋亡及诱导G2/M期阻滞有关，并且接种沉默cofilin-2 的CNE-2R细胞的裸鼠体内肿瘤组织生长也受到抑制；表明cofilin-2可作为一个预测鼻咽癌放疗反应的蛋白标志物及潜在治疗靶点。