基于iTRAQ技术水蛭干预IgA肾病血瘀证血-尿液差异蛋白质组学研究

IgA nephropathy (IgAN) is a high incidence of primary glomerular disease, and it is a common cause of end-stage renal disease. This study is going on the early clinical confirmed leech treatment based on blood stasis syndrome IgAN effectiveness, It will set up IgAN rat model of blood stasis syndrome, which is used isobaric tags for relative and absolute quantification (iTRAQ) combined the technology of LC - MALDI - TOF/TOF detection IgAN blood stasis rats blood and urine protein fingerprint，to compare of serum and urine differentially expressed proteins about IgAN blood stasis rats which were treatment by leeches ，and then the results will be compared with normal rats, prednisone intervention group, by doing so，select IgAN blood stasis and leeches specifically expressed in serum, urine protein before and after intervention. These data will be using bioinformatics Cluster 3.0 software for clustering analysis, using Javas software of visual display，using online David tools gathered together in the same group of differences in protein molecular functions and subcellular localization，using kEGG pathway analysis，to find the difference of protein identification and validated using Western Blot，clarify IgAN serum protein of blood stasis syndrome and urine protein expression spectrum difference and its correlation, From proteomics reveals IgAN blood stasis of the overall system of material basis and leeches the curative effect of huoxue quyu mechanism.

IgA肾病(IgAN)是高发病率的原发性肾小球疾病，是导致终末期肾衰竭的常见原因。本项目在前期临床证实水蛭治疗血瘀证IgAN有效性基础上，通过复制IgAN血瘀证大鼠模型，运用iTRAQ结合LC-MALDI-TOF/TOF技术检测IgAN血瘀证大鼠血-尿液蛋白指纹图谱，比较IgAN血瘀证大鼠及其水蛭干预前后的血清、尿液差异表达蛋白，并与正常大鼠、强的松干预组作对照，筛选出IgAN血瘀证及其水蛭干预前后的血清、尿液特异表达蛋白，运用生物信息学Cluster 3.0软件进行聚类分析，用Javas软件进行可视化显示，运用在线David工具分析聚集在同一群差异蛋白质的分子功能和亚细胞定位，KEGG信号通路分析，并对差异蛋白进行鉴定和Western Blot 进行验证，阐明IgAN血瘀证血清蛋白和尿液蛋白表达谱差异及其相关性，从蛋白质组的整体系统揭示IgAN血瘀证的物质基础及水蛭活血祛瘀的疗效和机制。

IgA 肾病（IgAN）发病率高，是导致终末期肾衰竭的常见原因，以血尿为主要临床表现，瘀血是导致病情持续或加重的重要病理因素，水蛭是临床治疗 IgAN血瘀证常用的中药。本项目主要研究内容：通过建立血瘀型IgAN模型（空白对照组除外），分为水蛭低中高剂量治疗组与强的松组、空白对照组、模型组、生理盐水对照组，对应治疗14周后采血及收集24小时尿液，应用iTRAQ 技术进行检测分析，找到差异蛋白。结果：以p-value < 0.05且fold change < 0.83 或 fold change > 1.2为差异蛋白筛选标准，血液样本筛选出的 21 个差异蛋白，采用 string 软件绘制差异蛋白功能网络发现与 IgAN 血瘀证发生发展密切相关的蛋白，主要集中在载脂蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂和鸟苷酸环化酶等，尿液样本筛选出的 19 个差异蛋白，采用 string 软件绘制差异蛋白功能网络发现与 IgAN 血瘀证发生发展密切相关的蛋白，主要集中在血清白蛋白、补体 C4 、凝血因子和谷氨酰胺氨肽酶等，通过KEGG 通路的富集度分析结果，血液样本筛选出和IgA肾病发生发展密切相关的主要有 4 条分子信号通路，主要集中在补体和凝血级联通路，代谢信号通路，嘌呤代谢和嘧啶代谢途径。尿液样本筛选出和IgA肾病发生发展密切相关的主要有 10 条分子信号通路，主要集中在补体和凝血级联途径，FcγR介导的吞噬作用信号通路，肌动蛋白细胞骨架调节途径，细胞粘附分子通路途径，抗原递呈信号途径，肾素-血管紧张素系统，蛋白质的消化和吸收途径等。科学意义：通过应用 iTRAQ 技术筛选出水蛭治疗后IgAN血瘀证大鼠血和尿液标本中差异表达蛋白及其相关性，揭示 IgAN 血瘀证的物质基础及水蛭活血祛瘀的疗效机制，为深入研究水蛭治疗IgA肾病的作用机制奠定基础。