基于免疫反应的食品中植物生长调节剂残留高灵敏快速分析新技术研究

The immune holoantigen and detecting antigen of paclobutrazol and uniconazole will be designed and synthetized by different methods, including the application of carbonyl diimidazole (CDI), succinic anhydride method and so on, and the relationship between different sites and immunocompetence will be investigated. This experiment will be immune to Balb/C mice, prepare monoclonal antibodies of resisting paclobutrazol and uniconazole by the cell fusion technology, and then mark the monoclonal antibodies with colloidal gold, to make the immunochromatographic test strip by the conditions of antibody (pH, antibody best dosage, etc) being optimized.A rapid sensitive method for the quantitative analysis of paclobutrazol and uniconazole in food was established combined with the portable spectrometer to read the immunochromatographic test strip. Meanwhile, different pretreatment techniques, including microwave-assisted extraction,matrix solid-phase dispersion, will be investigated for extraction and purification of paclobutrazol and uniconazole in food such as grain,fruits and edible oil.On the basis of that ，a new method for simultaneous determination of paclobutrazol and uniconazole residues in food will be established by chromatographic analysis techniques in this study. Furthermore, the technical feasibility of rapid quantitative detection of paclobutrazol and uniconazole in food above will be confirmed by the comparation of the results of colloidal gold immunochromatographic rapid detection technology with chromatographic analysis.

应用羰基二咪唑、琥珀酸酐法等不同方法设计并合成多效唑、烯效唑免疫全抗原及检测抗原，并研究不同连接位点与其免疫活性的构效关系。免疫Balb/C小鼠，采用细胞融合技术制备多效唑、烯效唑单克隆抗体，并与胶体金进行标记，同时对标记抗体的条件（pH、抗体最佳用量等）进行优化，以制备多效唑、烯效唑胶体金免疫层析试纸，结合便携式胶体金光谱读取仪，构建多效唑、烯效唑高灵敏快速定量分析新技术。运用微波辅助萃取、基质固相分散提取等技术，系统地探讨粮食（谷物、小麦）、水果和食用油等食品中多效唑和烯效唑同时提取、净化条件，结合高效液相色谱-质谱技术，研究建立上述食品中多效唑和烯效唑同时检测新方法。运用所构建的胶体金免疫层析快速定量分析新技术对粮食（谷物、小麦）、水果和食用油中多效唑、烯效唑进行检测，并与色谱分析结果进行对照，以确立所构建的胶体金免疫层析快速定量检测技术的可行性。

多效唑和烯效唑是三唑类植物生长调节剂，常用于农作物的生长控制。现有研究表明，一定剂量的多效唑和烯效唑对动物具有一定的毒性。多效唑和烯效唑如使用不当，极有可能导致其在果蔬、粮食等食品中残留量过高，也将会对消费者的身体健康带来一定的威胁。为此，许多国家和国际组织高度关注多效唑和烯效唑使用的安全性,陆续出台了一些食品中该类植物生长调节剂的限量标准。因此，开展食品中多效唑、烯效唑等植物生长调节剂残留量快速有效的检测新技术研究，对保障食品品质安全，具有重要的现实意义。本项目以多效唑和烯效唑为研究的主要目标化合物，应用琥珀酸酐法、碳二亚胺法、羰基二咪唑等不同方法制备了多效唑、烯效唑免疫全抗原及检测抗原，并研究不同连接位点与其免疫活性的构效关系，筛查出免疫活性较好的免疫原。应用所制备的多效唑、烯效唑免疫抗原分别免疫Balb/C小鼠，采用细胞融合技术，制备了多效唑单克隆抗体（命名为10F8）和烯效唑单克隆抗体（命名为1B11-G11-D10-C11-A7），IC50分别为36.05 ng/mL、11.26 ng/mL。在此基础上，将多效唑、烯效唑单克隆抗体与胶体金进行标记，分别制备了多效唑、烯效唑胶体金免疫层析试纸，结合便携式胶体金光谱读取仪，构建了食品中多效唑、烯效唑高灵敏快速定量分析新方法。结果表明，该方法灵敏度高、特异性好、快速简便。多效唑的检测限为9.5ng/mL、烯效唑的检测限为6.0 ng/mL，一些结构类似物不会干扰目标物的检测。所构建的胶体金免疫层析定量分析新技术能够满足不同基质的食品样品中多效唑、烯效唑现场快速检测的要求。本项目的研究为食品中多效唑、烯效唑残留监控提供了新的技术手段。