红活麻总香豆素调节DCs/Tregs诱导免疫耐受防治RA的作用机制研究

树突状细胞（DCs）和调节性T细胞（Tregs）是建立免疫耐受的两大关键细胞，不成熟DCs可促进Tregs分化，抑制免疫反应，重建免疫耐受；而Tregs又可通过其膜相关分子抑制DCs成熟，诱导免疫耐受。DCs/Tregs相互作用影响自身免疫性疾病的转归。本研究基于前一个基金项目的发现：红活麻总香豆素可抑制DCs成熟和其抗原呈递功能,促进CD4+CD25+Foxp3+Tregs活化，诱导抗原特异性免疫耐受，拟在单细胞水平、混合细胞体系、体内II型胶原诱导的小鼠关节炎（CIA）模型和采用细胞过继转移CIA的细胞治疗方式，深入研究红活麻总香豆素有效部位及主要单体成分体内外调节DCs、Tregs及细胞间相互作用的方式和靶点，探索红活麻总香豆素通过DCs和Tregs诱导免疫耐受，发挥治疗类风湿关节炎（RA）作用的分子机制，以期将其研制成为具有重要临床应用价值的中药新药。

本课题组完成了红活麻中总香豆素的提取、分离、鉴定、含量测定的完整工艺，该工艺使总香豆素提取率占乙醇提取物的 67~73%, 占总药材的4~6%。完成了关于红活麻总香豆素对树突状细胞（DCs）和CD4+CD25+Foxp3+（Tregs）表型、功能和相关共刺激分子、DC-T细胞混合淋巴细胞反应作用及调节网络相关膜抗原、膜表面分子的体外作用研究。研究发现，红活麻总香豆素体外可通过PD-1/PD-L1通路明显抑制DC细胞表型和功能，使DC处于未成熟状态，又可通过促进Foxp3+调节性T细胞分化和上调CTLA-4表达发挥免疫抑制效应。 在此基础上,我们进行了基于骨髓来源DCs PD-1/PD-L1信号通路的主要单体成分红麻素诱导免疫耐受作用的体外作用机制研究,并阐明了红活麻作用的物质基础。.我们根据研究计划在BABL/c小鼠体内建立了Ⅱ型胶原诱导的模拟人类风湿关节炎的胶原关节炎模型（CIA），研究红活麻总香豆素对体内DCs与Tregs及相互作用与疾病防治的关系。 结果发现总香豆素可抑制Th1细胞因子IFN-γ、IL-2的产生, 提高Th2细胞因子IL-10 和TGF-β的分泌水平，促进Treg 细胞的分化，抑制DCs的T-bet表达及其表面MHC- II和CD86分子的表达，阐明了总香豆素促进DCs与Tregs相互作用，长期缓解RA的作用机制；我们的研究还发现红活麻总香豆素可通过促进Treg分化和Foxp3mRNA表达，下调DCs细胞表面TLR4受体下游MyD88依赖性和非依赖性信号通路，发挥逆转自身免疫型糖尿病即1型糖尿病的作用。.此外，基于红活麻总香豆素抑制天然免疫细胞上的模式识别受体TLR4，我们又在炎性肠病模型上研究了红活麻总香豆素抗炎免疫调节作用。研究发现总香豆素可缓解葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病（IBD），下调结肠组织TLR4及NF-kB的表达，降低炎症因子的水平，有效地控制IBD的发生发展。.我们培养了2名中青年学术带头人，5名硕士毕业，2名博士毕业。我们共发表了7篇文章，其中其中4篇文章被SCI收录。我们在两个全国学术会进行了交流，并获优秀论文奖。研究成果获得一项发明专利，专利号：ZL 200910062442.8”。