当归六黄汤免疫调控胰岛素抵抗的作用机制及配伍研究

Insulin resistance (IR) plays a central role in the development of diabetes and is also a low degree of chronic metabolic inflammation.The obesity and abnormal lipids metabolism increase infiltration of inflammatory cells，the secretion of cytokines and lipid metabolites,which cause the decrease in insulin sensitivity. It has been found that the unique regulatory T cells(Tregs) expressing PPAR-γ and recruiting in visceral adipose tissue of obese, could improve insulin sensitivity through anti-inflammation and immunosuppression effects,which makes it to be a potential target of treating IR.Dangguiliuhuang decotion which is from Lan Shi Mi Cang has an effect on diabetes and its complications. Our preliminary study revealed that Dangguiliuhuang decoction could not only induce Treg cells,protect pancreatic β cell and reduce the incidence of T1DM, but also improve glucose and lipid metabolism, increase insulin sensitivity and treat T2DM.To clarify its mechanism and material basis of anti-IR, the spontaneous animal model of IR will be uesed to confirm efficacy of compunds and the best compatibility of medicines;the immune regulation of metabolism of compound prescription and its compatibility is going to explore; the interaction of inflammation cells and immune cells, the correlation of Foxp3 and PPAR-γ will be studied; and inflammation and insulin resistance signaling path way will be analyzed; transgenic animals and cells adoptive transfer model will be used to identify molecular targets of anti-IR and scientificity of Dangguiliuhuang decoction's compatibility.

胰岛素抵抗（IR）为糖尿病的主要发病环节，也是慢性炎症。肥胖及脂质代谢异常可促进炎症细胞浸润、细胞因子和脂肪代谢物分泌而降低胰岛素敏感性。最新研究发现肥胖者的内脏脂肪组织聚集表达PPAR-γ的独特调节性T细胞（Tregs），通过抗炎及免疫调节增加胰岛素敏感性，成为IR治疗的潜在靶点。取自《兰室秘藏》的名方当归六黄汤具有治疗糖尿病及其并发症的作用。前期研究发现当归六黄汤既可诱导Tregs，保护T1DM胰岛β细胞，又可改善糖、脂代谢，增加胰岛素敏感性而抗2型糖尿病。为明确其抗IR作用机制及物质基础，我们拟通过IR自发病动物模型确定复方药效及最优配伍；通过内脏脂肪组织炎症细胞与免疫细胞相互作用、Foxp3与PPAR-γ的相互关联以及炎症信号通路和胰岛素抵抗信号通路的分析，探讨复方和配伍的免疫调控代谢作用机制；通过转基因动物及细胞过继转移模型明确当归六黄汤抗IR分子靶点以及治疗糖尿病的配伍科学性。

当归六黄汤是由当归、生地黄、熟地黄、黄芩、黄连、黄柏和黄芪共同组成的一个传统的中药复方。我们首先利用高效液相色谱法对复方中的主要活性成分进行定性及定量研究，共分析出了9个DGLHD中的主要活性成分，并确定了其质量浓度。我们采用NOD小鼠作为1型糖尿病模型，发现DGLHD可以降低淋巴细胞对胰岛的炎性浸润及促炎因子的表达，抑制DC的成熟和T淋巴细胞的增殖。同时能够上调NOD小鼠体内Treg的表达，从而发挥免疫抑制作用，并下调NOD小鼠JAK2-STAT3通路，发挥抗糖尿病作用。.进而我们采用ob/ob小鼠作为2型糖尿病模型，研究DGLHD抗IR和NAFLD作用。发现与抗1型糖尿病作用机制一致，DGLHD同样能够抑制ob/ob小鼠DCs的成熟，减弱DCs刺激下T淋巴细胞的增殖，增加Tregs细胞的分化，并且能够影响PI3K/Akt信号通路，增加PPAR-γ表达。3T3-L1细胞和HepG2细胞构建的IR和非酒精性脂肪肝的体外模型证实DGLHD可以促进IR状态下3T3-L1细胞的PI3K/Akt通路活化及葡萄糖吸收，降低脂质生成有关基因的表达水平，增加脂联素的基因水平，减弱炎症细胞因子TNF-α和IL-6的分泌。.另外，我们采用网络药理学的方法探讨了DGLHD的主要活性成分和靶点及其抗肝纤维化的作用机制，共发现了76个潜在活性化合物，通过PubMed 和TCMSP数据库共收集了潜在活性化合物的286个作用靶点，进而筛选出了72个节点数大于3的靶点进行通路和功能富集，发现DGLHD可明显调节NF-κB、MAPK、PI3K/Akt、NAFLD和hepatitis等相关通路，影响细胞增殖、凋亡、炎症应答、PPAR和NF-κB分子的活性。再利用小鼠肝纤维化体内模型证实了DGLHD可通过增强PPAR-γ的活性，减弱NF-κB的活力，抑制ECM的生成，缓解炎症情况，进而抑制肝纤维化的发展。