马立克氏病病毒编码miRNA基因簇3在病毒致病过程中分子调控机制研究

Marek’s disease virus (MDV)-induced marek’s disease (MD), a highly contagious neoplastic disease of chickens, is proved as an ideal infectious model for herpesvirus-related cancer research. Our earlier study demonstrated that MDV latency-associated transcript (LAT)-encoded miRNA cluster control pathogenesis through modulation virus cytolytic replication and reactivation. To further study the detailed effects of MDV-encoded miRNA clusters and related individual miRNA in pathogenesis, viruses modified by reverse genetics of the bacterial artificial chromosome (BAC) system are needed. In the present study, we plan to generate different miRNA clusters and related individual miRNA deletion mutants. Meanwhile, we will confirm the results by generating revertant viruses with a restored wild type phenotype. Using MDV-infected chicken induced neoplastic disease as the viral host model, we focus on disclosure of the molecular mechanism of miRNAs in MDV pathogenesis.

马立克氏病病毒(MDV)感染引起鸡高度感染性肿瘤疾病是研究疱疹病毒编码miRNA调节作用的理想模型。利用该模型，前期研究表明：MDV潜伏期相关转录子编码miRNA簇通过调节体内早期复制和第二次感染而调控病毒的致病性。为进一步研究MDV编码miRNA簇3及其相关单个miRNA对病毒致病过程的精细调节，本研究拟利用细菌人工染色体(BAC)操作技术，构建MDV编码miRNA簇及相关单个miRNA缺失的BAC重组病毒；同时在基因缺失病毒的基础上，重新插入缺失的单个miRNA或者miRNA簇3以验证缺失毒株表型的特异性。本研究旨在利用MDV感染鸡引起的淋巴瘤作为疾病模型，揭示miRNA簇3在MDV致病过程的分子调控机制。

马立克氏病病毒（MDV）感染引起鸡高度感染性肿瘤疾病是研究疱疹病毒编码miRNA调节作用的理想模型。利用该模型，前期研究表明：MDV潜伏期相关转录子编码miRNA基因簇通过调节体内早期复制和第二次感染而调控病毒的致病性。为进一步研究MDV编码miRNA基因簇3及其相关单个miRNA对病毒致病过程的精细调节，本研究的主要研究内容是构建Md5超强毒株的细菌人工染色体，以此为平台，构建MDV编码miRNA簇及相关单个miRNA缺失的BAC重组病毒，同时在基因缺失病毒的基础上，重新插入缺失的单个miRNA验证基因表型的特异性。项目获资助实施以来，首先，成功构建了超强毒株Md5的细菌人工染色体，并以此为平台，利用RED两步法同源重组技术，构建了基因簇3中的全部5个miRNA前体基因缺失的MDV-1毒株，以及它们的回复突变株。体外试验显示，基因缺失不影响病毒的体外增殖；体内试验显示，与亲本毒相比，miRNA-M7基因缺失毒株增强了病毒的致死率，且引起严重的免疫器官萎缩，miRNA-M7基因缺失后，能够显著提高病毒的体内复制能力，尤其是攻毒后第5天，显示miRNA-M7有可能参与抑制病毒的早期溶细胞期复制，为进一步揭示病毒miRNA在MD肿瘤发生中的分子调控机制奠定了重要基础。