卵巢癌血浆microRNA潜在标志物筛选及调控机制研究

卵巢癌的发病及死亡率在中西方呈上升趋势，因无理想的筛查标志物使早诊率在30%以下，建立简便、准确的诊断方法十分必要。研究发现miRNA在血液中稳定存在，其表达谱与肿瘤等疾病相关，血浆或血清中能检出肿瘤特异的miRNA，这对癌症的早期诊断、进展监测、预后预测等至关重要。本课题组前期工作发现，卵巢癌患者血浆miR-141的表达显著高于正常对照，且对卵巢癌具有高度的敏感性和良好的特异性。为全面评估卵巢癌miRNAs表达谱的改变，拟将采用TaqMan低密度芯片筛选卵巢癌特异血浆miRNAs标志物并进行分期验证；在此基础上对miR-141和候选的其他miRNAs进行调控机制研究，以期寻找新的卵巢癌的治疗靶点。目的是寻找可用于卵巢癌初筛、早诊及预后预测的血浆miRNAs标志物，为提高卵巢癌早诊率降低死亡率提供新指标，为预后预测及寻找治疗靶点提供参考，为揭示卵巢癌的发生发展提供理论依据。

卵巢癌的发病及死亡率在中西方呈上升趋势，因无理想的筛查标志物使早诊率在30%以下，建立简便、准确的诊断方法十分必要。研究发现miRNA在血液中稳定存在，其表达谱与肿瘤等疾病相关，血浆或血清中能检出肿瘤特异的miRNA，这对癌症的早期诊断、进展监测、预后预测等至关重要。本研究在360例卵巢癌和200例健康对照样本中经过筛选、验证及进一步验证3个阶段的研究发现，卵巢癌血浆中miR-205表达上调和let-7f表达下调联合可作为卵巢癌的诊断标志物，其诊断灵敏度和特异性相当于CA-125，特别是对于早期卵巢癌或是CA-125阴性样本中，诊断价值更高。miR-205和let-7f联合诊断的灵敏度在64.3%-68.4%，特异性在72.0%-92.9%。血浆中let-7f表达水平与卵巢癌患者的无进展生存显著相关(P=0.006)，血浆中let-7f表达越低，患者预测越差。.与正常对照比较，卵巢癌患者血浆中miR-483-5p的表达上调，且与组织表达正相关；同时无论是血浆还是组织中，miR-483-5p表达与卵巢癌患者临床分期有关，晚期组miR-483-5p表达高于早期组，差异由统计学意义（血浆中P=0.043，组织中P=0.048）；且组织中miR-483-5p的表达与患者生存有关，miR-483-5p表达高，患者预后差（P=0.059），在浆液性卵巢癌中更加明显（P=0.034）。.miR-483-5p基因位于IGF2的intro1-2上，在组织中的表达与IGF2基因mRNA表达显著正相关（R=0.748, P=4.86×10-18）。miR-483-5p靶基因的预测采用美国TCGA数据与TargetScan预测软件结合的方法，得到3个候选靶基因ELK1、FTSJD2和KLHDC3，通过荧光素酶双报告基因和Western blot方法，共同确定FTSJD2有可能是miR-483-5p的靶基因，miR-483-5p表达与FTSJD2表达不相关，但IGF2、FTSJD2和ELK1基因mRNA表达两两之间有相关性（n=94），且miR-483-5p和IGF2表达与卵巢癌患者的生存有关（P=0.028， P=0.024）。FTSJD2基因是Cap甲基转移酶，其功能与mRNA转录有关，到目前未发现其与肿瘤相关。转染miR-483-5p后，卵巢癌细胞表型未见明显改变。