下齿槽神经缺失对下颌骨牵张成骨影响的蛋白质组学分析

本研究拟采用动物实验，制备犬下齿槽神经缺失的下颌骨牵张成骨模型，采用双向电泳和质谱分析技术等蛋白质组学研究方法，从蛋白质整体水平探讨下齿槽神经支配的缺失对牵张成骨的组织改建过程的影响，检测其新生骨痂中蛋白组的表达变化，找出差异蛋白，阐明这些蛋白质的功能以及在下齿槽神经损伤后对牵张成骨中所取的作用及其分子调控机制，以期为研究神经系统对骨再生修复的作用提供参考并奠定实验基础。

牵张成骨技术的出现大大推进了修复骨组织缺损及纠正骨畸形的实验研究，被认为是“真正意义上的骨再生”，其机理尚未明了，而感觉神经缺失对牵张成骨的新骨形成的调控作用尚未所知。蛋白质是生物功能最为主要的体现者，而其自身有着特有的活动规律，蛋白质组是整体概念，随着时间空间变化而发生动态变化，只有开展蛋白质组学研究，即对所有蛋白质总和进行研究，才能更好地揭示生命活动的本质和发现生命活动的规律，才能更好地掌握生命现象和本质的。将蛋白质组学技术应用于牵张成骨技术，经3年的研究，已获部分成功，同时进一步发现新的问题并对新问题进行了初步探索性研究，主要结果：1、成功建立了下齿槽神经缺失大鼠下颌骨牵张成骨的动物模型，对新生骨组织理化性能分析测定，结果显示感觉神经缺失对牵张成骨的新骨形成有一定的负向调节作用。2、成功提取大鼠下颌骨牵张成骨不同时间结点及下齿槽神经缺失大鼠下颌骨牵张成骨相同时间结点新生组织的总蛋白质。3、采用考马斯亮蓝（Bradford）法测定不同总蛋白质样本的浓度，进行蛋白质定量，为进一步进行蛋白质组学分析奠定了坚实的基础。4、成功应用蛋白质组学iTRAQ技术对大鼠下颌骨牵张成骨不同时间结点的总蛋白进行了蛋白质组学分析，结果显示质谱鉴定出置信度95%的蛋白质共567种，共鉴定出差异蛋白207个，其中上调≥1.5倍的47个，下降≤0.8倍的58个，筛选出多种与牵张成骨过程中新骨形成相关的差异表达蛋白质，为进一步验证与新骨形成相关的蛋白质奠定了基础。5、成功应用蛋白质组学iTRAQ技术对下齿槽神经缺失大鼠下颌骨牵张成骨牵张期新生组织的总蛋白进行了蛋白质组学分析，结果显示质谱鉴定出置信度95%的蛋白315种，共鉴定出差异蛋白146个，其中上调≥1.5倍的39个，下降≤0.8倍的58个筛选出多种下齿槽神经缺失下颌骨牵张成骨牵张期新骨形成相关的差异蛋白，为进一步验证感觉神经缺失对下颌骨牵张成骨新骨形成相关蛋白质奠定了基础。此外，我们还发现下颌骨牵张成骨本身对感觉神经表达也存在一定调控作用，此方面发现为今后的研究提供了新的研究思路与空间，将在下一步的研究中进行深入探讨。