记忆性NK细胞通过IFN-γ杀伤Notch1急性T淋巴细胞白血病的作用及机制研究

记忆性NK细胞可以在体外被诱导产生并分泌大量的IFN-γ，而且这种能力可以传递给子代细胞；同时前期研究发现转染Notch1基因的小鼠白血病模型可以模拟临床上的急性T淋巴细胞白血病，IFN-γ在NK细胞对其杀伤过程中起到间接作用。但是由于Notch1白血病细胞表达IL-2受体的α链CD25,因此不能用IL-2增强NK细胞对该白血病的杀伤作用。据此我们进一步在Notch1白血病小鼠模型的基础上，应用体外实验的原理和预实验的基础，诱导体内产生记忆性NK细胞，并阐明IFN-γ的大量分泌与记忆性NK细胞杀伤能力之间的关系，探讨IFN-γ与NK细胞上活化受体NKG2D和白血病细胞上NKG2D配体三者之间是否存在正向协同关系，从而促进记忆性NK细胞对白血病细胞的杀伤。该项研究为记忆性NK细胞应用到临床白血病的治疗方面提供新的思路和动物实验数据，具有重要的理论和现实意义。

首先，经过反复的剂量实验，建立体内生成大量分泌IFN-γ的记忆性NK细胞时需要的白细胞介素适宜剂量，即小鼠体内初次给予IL-12 (4.5ug/只)、IL-15(5.5ug/只)和IL-18(22ug/只)，3周以后，体内再次给予IL-12 (5ug/只) 和IL-15 (8ug/只)，产生的分泌IFN-γ的NK细胞数量的百分比达到阳性对照组的数量。并且证明体内生成的这种大量分泌IFN-γ的NK细胞不需要体内白介素的持续刺激。而且，这种体内给予初次及再次白介素刺激后生成的分泌IFN-γ的记忆性NK细胞的方法，亦可用在BALB/c + RagKOB6〉→BALB/c的嵌合体小鼠的骨髓移植中。进一步证明在此类NK细胞的子代细胞中，亦可生成大量分泌IFN-γ的NK细胞，其百分比无明显差异。其次，结合体内生成大量分泌IFN-γ的记忆性NK细胞的小鼠模型与Notch1急性T淋巴细胞白血病的小鼠模型，证明了这种大量分泌IFN-γ的记忆性NK能够延长白血病小鼠的生存期。体内的产生分泌IFN-γ的记忆性NK细胞延长小鼠的生存期依赖于IFN-γ的存在，用IFN-γ抗体中和分泌的IFN-γ后，缩短了小鼠的生存时间。最后，IFN-γ的抗白血病依赖于NK细胞的活化受体NKG2D以及NKG2D的配体MULT1 和Rae-1的存在。进一步明确了NKG2D及其配体的缺失亦影响了IFN-γ的抗白血病作用及IFN-γ的分泌。制备了MULT1缺陷和Rae-1缺陷的Notch1白血病细胞。在产生这种记忆性NK细胞的小鼠模型中，中和NKG2D，或给予MULT1及Rae-1缺陷的Notch1白血病细胞，明显缩短了小鼠的生存时间，且NK细胞分泌的IFN-γ明显减少。. 本研究从动物体内实验方面阐明记忆性NK细胞对急性T细胞白血病的杀伤作用及机制，为临床上体内扩增和活化记忆性NK细胞治疗急性T细胞白血病提供依据。目前发表在国内核心期刊上的论文2篇（通讯作者），发表在SCI论文1篇（第二作者），中华医学会的血液病会议论文2篇（第一作者），国际性的亚太地区骨髓移植会议论文1篇（第一作者），根据主要研究成果正在撰写的论文1篇。获得吉林省自然科学学术成果奖二等奖1个（第一名）。