基于蛋白印迹膜的水中痕量病毒快速检测系统

以大肠杆菌F+RNA噬菌体为模式病毒，Qβ血清型噬菌体外壳蛋白为模板，合成蛋白分子印迹膜（蛋白MIM），结合分子生物学检测技术，将蛋白MIM同时作为分离材料和检测载体，建立可快速准确检测水中痕量病毒的新方法。首先用蛋白MIM高效特异性吸附水中痕量靶病毒，然后分别建立两种原位快速检测方法：一是直接在MIM上依次进行病毒裂解、RT-PCR扩增，PCR扩增产物与荧光标记的血清型特异性核酸探针原位杂交，对膜上的病毒进行核酸分型和定量；二是利用荧光标记的病毒血清型抗体与膜上病毒特异性结合，直接对膜上的病毒进行抗原分型和定量。两种方法分别平行检测同一水样，核酸和抗原检测结果互为内对照，分别从核酸水平和抗原水平确定水中病毒的滴度和类型，保证了检测的灵敏度、特异性和准确性。本研究为快速、准确检测水中痕量病毒提供了一种新方法，在医学、环境、农业等多个领域均有极好的应用前景，具有重要的科学、社会和经济价值。