靶向癌相关成纤维细胞的纤毛蛋白修饰、六联体嵌合型溶瘤腺病毒载体的实验研究

癌相关成纤维细胞（CAFs）与肿瘤细胞的交互作用在肿瘤的发生、发展、复发、转移乃至抵抗治疗等过程中都发挥着至关重要的作用。靶向CAFs进行肿瘤间质治疗，使肿瘤成为无本之木，是一种非常有前景的肿瘤治疗策略。但以往的研究多以小分子药物或单克隆抗体为主，不仅制备工艺复杂，且靶点相对单一，疗效有限。鉴于此，我们在本研究中引入了肿瘤间质生物治疗的概念，即利用溶瘤腺病毒特异性地杀伤CAFs。虽然腺病毒具有诸多优点，但其对CAFs的感染能力较差，且存在肝脏亲嗜性和免疫原性强等问题。为此，我们拟在保留腺病毒固有优点的基础上，综合运用纤毛蛋白修饰、转录水平调控以及六联体嵌合等多种策略对腺病毒载体进行改造，构建一种可以特异、高效地感染并杀伤CAFs，且低肝脏亲嗜性、低免疫原性的溶瘤腺病毒载体，用于肿瘤间质生物治疗。希望通过本研究为肿瘤间质治疗开辟一条新的途径。

癌相关成纤维细胞（CAFs）与肿瘤细胞的交互作用在肿瘤的发生、发展、复发、转移乃至抵抗治疗等过程中都发挥着至关重要的作用。靶向CAFs进行肿瘤间质治疗，使肿瘤成为无本之木，是一种非常有前景的肿瘤治疗策略。但以往的研究多以小分子药物或单克隆抗体为主，不仅制备工艺复杂，且靶点相对单一，疗效有限。鉴于此，我们在本研究中引入了肿瘤间质生物治疗的概念，即利用溶瘤腺病毒特异性地杀伤CAFs。虽然腺病毒具有诸多优点，但其对CAFs的感染能力较差，且存在肝脏亲嗜性和免疫原性强等问题。为此，我们拟在保留腺病毒固有优点的基础上，综合运用纤毛蛋白修饰、转录水平调控以及六联体嵌合等多种策略对腺病毒载体进行改造。首先，利用在CAFs内活性明显增高的基质衍生因子启动子和缺氧反应元件分别调控腺病毒立早启动基因E1A和E1B；其次，在腺病毒纤毛蛋白头区的HI环内插入可以与CAFs表面高表达的FAP特异性结合的短肽片段；最后，用低肝脏亲嗜性、低免疫原性的Ad48型腺病毒的高变区替换Ad5的相应部分。同时，我们成功分离了胃癌、结直肠癌以及乳腺癌等原代培养肿瘤相关成纤维细胞及其相应的肿瘤细胞，用于实验。体外实验证实：改造后的腺病毒对CAFs的感染能力明显增强，且FAP单克隆抗体可有效减弱这一效应；其在CAFs内可以大量复制并杀伤CAFs；按MOI=1加入病毒，感染后7天即可出现明显的CPE，10天时可杀灭全部的CAFs；在缺氧条件下，改造后的腺病毒对CAFs的杀伤能力得到进一步的增强；改造后的溶瘤腺病毒与化疗药联合应用，对CAFs的杀伤能力均显著增强，显示出较明显的协同作用。动物试验证实：与用作对照的溶瘤腺病毒相比，改造后的腺病毒对肝脏的亲嗜性明显降低；可以显著抑制肿瘤的生长，提高动物的生存率；且有明显的量效依存关系；免疫组化检测显示改造后的病毒靶向的是肿瘤间质组织。因此，本研究所构建的是一种可以特异、高效地感染并杀CAFs，且低肝脏亲嗜性的溶瘤腺病毒载体，可以用于肿瘤间质生物治疗，为肿瘤治疗开辟了一条新的途径。