Dectin-1通过细胞自噬途经对动脉粥样硬化斑块中M1巨噬细胞极性的调控机制研究

Promotion of autophagy may reduce M1 phenotype macrophages and stabilize the vulnerable atherosclerosis(AS) plaques. However, relative mechanisms remain unclear. Activation of dectin-1 can improve autophagy level, which may involve in the regulation of AS development. Moreover, in one of our preliminary experiment, we found that activation of dectin-1 receptor in M1 macrophage leads to a shift of macrophage phenotype towards M2 macrophage, accompanied by enhanced autophagy level and decreased NF-κB p65 protein expression in the cytoplasm. Combined with the fact that NF-κB p65 can be regulated by autophagy in tumor environment. We conclude “activation of dectin-1 receptor skews M1 macrophage towords M2 macrophage, which may be a result of decreased inflammatory cytokine and NF-κB p65 protein level in cytoplasm by autophagy.”We will establish AS model using ApoE-/- mice and M1 macrophage model, then employ western blot, immunoprecipitation, confocal microscopy technology to verify this hypothesis from animal to cellular level. This research will provide new ideas for the prevention and treatment of atherosclerosis.

提高细胞自噬活化程度可能会减少M1巨噬细胞比例，从而稳定动脉粥样硬化（AS）易损斑块，相关分子机制尚不明确。Dectin-1（C型凝集素家族）受体的激活可提高巨噬细胞自噬活化水平，参与AS发生发展过程的调节。我们的预实验结果初步显示，激活M1巨噬细胞Dectin-1受体后，M1巨噬细胞向M2巨噬细胞转变，且伴随细胞自噬水平升高，细胞质NF-κB p65 蛋白水平降低。结合肿瘤环境下自噬参与NF-κB p65调控的事实。我们推测“M1巨噬细胞Dectin-1受体激活后，细胞自噬水平升高，自噬降解细胞质中NF-κB p65 蛋白，减少炎症因子分泌，促进M1巨噬细胞向M2巨噬细胞转变”的假说。我们拟构建ApoE-/-小鼠AS模型及M1巨噬细胞诱导模型；采用Western blot，免疫共沉淀，共聚焦等技术，分别从动物、细胞层次证明上述假说。研究结果将为AS的防治提供新思路。

研究背景：促进炎症的M1巨噬细胞在动脉粥样硬化的发生发展中起着非常重要的作用。由于β –葡聚糖被证明有促炎的作用，本研究检测了β –葡聚糖是否可以促进巨噬细胞向M1型转换从而起到致动脉粥样硬化的作用。.主要研究方法：本研究采用了实时荧光定量PCR、流式细胞仪、western blotting、电镜、免疫荧光染色、HE染色等试验技术。.研究结果：β –葡聚糖处理巨噬细胞后，M1巨噬细胞的标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和CD80表达增加，β –葡聚糖的受体dectin-1的表达及NF-κ B的核转位增加，自噬水平降低。此外，dectin-1 siRNA、自噬诱导剂雷帕霉素、NF- κ B抑制剂SN50逆转了β –葡聚糖对自噬水平及巨噬细胞M1极化的影响，表明在β –葡聚糖诱导的巨噬细胞M1极化过程中，dectin-1及NF- κ B是自噬的上游。与dectin-1 siRNA单独处理比较，同时给予dectin-1 siRNA及SN50对β –葡聚糖降低自噬的作用的影响相似。这些结果表明dectin-1可能通过NF- κ B调控β –葡聚糖降低自噬的作用。相对应的，体内试验表明β–葡聚糖加速了ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的进展。β–葡聚糖调控主动脉dectin-1、bectin-1以及LC3II/LC3I的表达与体外巨噬细胞的研究结果一致。.研究贡献：β –葡聚糖通过增加dectin-1受体表达，激活NF- κ B信号通路以及降低自噬水平，从而促进M1巨噬细胞的形成。这些结果表明，针对M1巨噬细胞而降低dectin-1的表达是动脉粥样硬化潜在的治疗方法。这些结果不仅提供了β –葡聚糖促进动脉粥样硬化进展的理论依据，并且为临床治疗动脉粥样硬化提供了新的靶点。