小RNA调控ICP4对I型单纯疱疹病毒裂解性感染的效应及机制研究

ICP4是单纯疱疹病毒I型(HSV-1)病毒复制时的早期调控基因，也是病毒产生的microRNA-H6(miR-H6)的靶基因。我们前期结果表明miR-H6是HSV-1感染角膜上皮细胞中唯一高表达的miRNA，转染针对ICP4的siRNA或miRNA能抑制细胞中的病毒复制。现推测miR-H6- - ICP4通路在病毒裂解感染中能起关键调控作用，改变该通路的活性能控制病毒复制。本课题将在培养角膜上皮细胞和小鼠角膜的HSV-1感染模型中，用功能基因组学方法研究miR-H6- - ICP4通路影响病毒复制的分子机制；同时用阳离子载体转染siRNA，观察其在体内外抑制HSV-1裂解性感染的效应，并探讨在眼表进行非侵入性导入小RNA的方法。结果对揭示病毒miRNA调控自身复制及影响宿主细胞分子反应的规律有重要意义，同时可为HSV-1感染性眼病的治疗提供一种新的策略，为进一步开展临床基因治疗眼表疾病奠定基础。

ICP4 是单纯疱疹病毒I 型(HSV-1)病毒复制的早期调控基因，也是病毒产生的microRNA-H6(miR-H6)的靶基因。我们前期结果表明miR-H6 是HSV-1 感染角膜上皮细胞中唯一高表达的miRNA。本课题围绕HSV-1裂解感染的关键基因ICP4开展工作，包括：1)体外实验研究发现，通过RNA干扰来抑制病毒ICP4的表达，可以有效的减低病毒在视网膜色素上皮细胞内的复制；2)将miR-H6转染到感染HSV-1的角膜上皮细胞内，可以减少ICP4表达，抑制病毒的繁殖，同时减低白介素6(IL-6)的产生。进一步说明通过抑制ICP4活性能控制病毒复制；3)在小鼠HSV-1角膜炎模型中，将针对ICP4的siRNA滴入眼表，能有效抑制病毒基因复制，减少角膜损害；4)在小鼠体内实验中，通过比较四种不同的阳离子载体，我们发现滴用以聚乙烯亚胺（polyethyleneimine，PEI）为载体的含siRNA制剂，能有效将其转染于角膜组织中，建立了滴眼转染小RNA的新方法；5)对眼科病人血缘性病原体的感染状态进行了回顾性分析。上述结果对探讨HSV-1的感染机制提供了新的实验证据，为防治HSV-1感染性眼病提供一种新的策略，也为我们进一步开展眼表疾病基因治疗奠定了基础。. 经本项目资助，目前已发表3篇SCI论文，另1篇文章已投稿待发表；参加国内外会5 人次；有2名博士研究生直接参加该项目研究并毕业。