利用苦参碱衍生物发现蛋白激酶CK2作为肝纤维化治疗靶点的研究

前期研究发现苦参碱衍生物13-甲氨基-18-硫代苦参碱(M19)具有显著抗肝纤维化作用，抑制肝星状细胞（HSC）活化、增殖和促进HSC凋亡，逆转肝细胞上皮细胞间质转型（EMT）过程，并且能特异结合蛋白激酶Casein Kinase II β亚基（CK2β）。CK2在细胞增殖和凋亡中有重要的作用，参与多种疾病进程，是一个有前景的治疗靶点，目前已发现许多不同作用模式的小分子CK2抑制剂，但是CK2与肝纤维化的关系仍为空白。本项目拟通过分析M19对CK2活性及CK2下游通路和相互作用蛋白的影响，利用CK2β过表达/RNA干扰技术确证M19是否通过CK2起作用，是否是一个靶向CK2β的新结构类型的CK2抑制剂。同时在细胞和整体动物水平上，研究CK2对HSC和肝细胞的功能以及肝纤维化病理进程的影响及相关性。研究结果将阐明M19抑制CK2的分子作用机制，揭示CK2在肝纤维化中的作用。

苦参碱具有抗炎、免疫抑制和抗肝纤维化的作用。前期研究发现苦参碱衍生物13-甲氨基-18-硫代苦参碱(M19)具有显著抗肝纤维化作用，抑制肝星状细胞（HSC）活化、增殖和促进HSC凋亡，逆转肝细胞上皮细胞间质转型（EMT）过程。本项目采用连续亲和层析色谱法以及竞争层析色谱法发现了苦参碱衍生物M19特异结合蛋白CK2，经激光共聚焦技术、反向分子对接技术和Biacore分子相互作用技术确证两者相互作用，然而体外酶活性实验证明M19不能抑制CK2酶活性。体内实验证明，M19能抑制BDL和DMN大鼠肝纤维化模型纤维化肝脏CK2的表达。同时我们发现，随着肝纤维化程度的不断加剧，CK2在纤维化组织中的表达明显增多。 CK2抑制剂和CK2 RNA干扰能促进肝星状细胞表达a-SMA，表明CK2参与了纤维化过程，是抗肝纤维化治疗的潜在靶点。研究发现，商陆有效成分EsA在体内具有抗肝纤维化作用，体外能结合CK2并抑制CK2酶活性，提示EsA抗肝纤维化作用机制与CK2抑制有关。此外，本课题还进一步制备了系列M19衍生物，并对其抑制肝星状细胞和肝癌细胞增殖进行了初步筛选。