NOD小鼠中B细胞表面PD-L1的表达及对自身反应性T细胞抑制作用的研究

PD-L1/PD-1是近年来发现的一条维持机体免疫耐受的重要抑制性通路，调节多种自身免疫疾病的发生发展。我们研究发现NOD鼠发生糖尿病的过程中，虽然胰岛β细胞高表达PD-L1，但它只能延缓却不能阻止糖尿病的发生。有研究显示B细胞是NOD鼠发生自身免疫性糖尿病的主要抗原递呈细胞，可活化自身反应性CD4+T细胞。但在我们研究中发现浸润到NOD鼠胰岛中的B细胞表面并不表达PD-L1。因此我们设想：在糖尿病发病过程中，B细胞缺乏PD-L1的表达是否是造成其无法抑制活化的CD4+T细胞，无法阻止糖尿病发生的原因？所以本课题拟通过建立NOD遗传背景下的PD-L1转基因小鼠，研究其B细胞对自身反应性CD4+T细胞的作用；通过过继性转移观察动物发病率、细胞表面分子的表达和细胞因子的分泌情况，深入探讨I型糖尿病发病过程中，表达PD-L1的B细胞对CD4+T细胞的抑制作用，为人类I型糖尿病的治疗提供新策略。

NOD小鼠发生糖尿病的病理过程和人类I型糖尿病的病理过程和发病机制极为相似，是目前研究人类I型糖尿病最好的动物模型。PD-L1/PD-1是近年来发现的一条维持机体免疫耐受的重要抑制性通路，调节多种自身免疫疾病的发生发展。我们研究发现NOD鼠发生糖尿病的过程中，虽然胰岛β细胞高表达PD-L1，但它只能延缓却不能阻止糖尿病的发生。有研究显示B细胞是NOD鼠发生自身免疫性糖尿病的主要抗原递呈细胞，可活化自身反应性CD4+T细胞。但在我们研究中发现浸润到NOD鼠胰岛中的B细胞表面并不表达PD-L1。因此我们设想：在糖尿病发病过程中，B细胞缺乏PD-L1的表达是否是造成其无法抑制活化的CD4+T细胞，无法阻止糖尿病发生的原因？所以本课题我们以 B细胞为的靶位点，通过建立NOD背景的PD-L1转基因动物，经基因鉴定和流式检测确定PD-L1的高表达，并且PD-L1的高表达并未影响T细胞的发育及B细胞原有生物学特性，建立了稳定的PD-L1/ PD-1信号通路。我们首先在体外验证了Bpd-l1细胞能够一定程度上抑制CD4+T细胞的增殖，减少IFN-γ和IL-2的分泌。又比较了Tgpdl-1-NOD和NOD小鼠胰岛被破坏程度和胰岛炎程度，结果表明PD-L1的高表达能够明显延缓小鼠胰岛炎的发生。国内外在糖尿病的研究中尚没有类似的实验研究报道，具有原创性和首创性。研究结果对治疗人类I型糖尿病提供新的治疗位点和策略，具有良好的应用前景。