固本抑瘤Ⅱ号祛邪、扶正组分不同时期应用对4T1乳腺癌细胞生长转移及mTOR通路介导的自噬作用差异研究

Eliminating Pathogenic Factors and Strengthening Body Resistance are the main rules for the treatment of breast cancer. GuBenYiLiu-II prescription, an in-hospital preparation based on the method of Eliminating Pathogenic Factors and Strengthening Body Resistance, was formulated by Professor Yu Ren-cun. The curative effect of GuBenYiLiu-II prescription has been confirmed by clinical practice. Our previous work has demonstrated that GuBenYiLiu-II could inhibit tumor growth in breast cancer bearing mice and its medicated serum could significantly inhibit the growth of the MCF-7 cells through autophagy pathway in vitro. We also found that the Eliminating Pathogenic Factors prescription and Strengthening Body Resistance prescription of GuBenYiLiu-II prescription have very different anti-tumor effect and autophagy effect. In this study，we will explore the tumor inhibition effect of GuBenYiLiu-II prescription and its compositions in vivo, the roles of autophagy pathways in the inhibition effect, the intervention effect on PI3K-Akt-mTOR pathway and related regulatory factors in cell autophagy. Then, we will do further research on the intervention effect of the Eliminating Pathogenic Factors prescription and Strengthening Body Resistance prescription used in different tumor-bearing stages on the effect anti-tumor, anti-metastasis and autophagy. The results will further reveal the anti-tumor mechanism of the method of Eliminating Pathogenic Factors and Strengthening Body Resistance and the scientific principles of compatibility of GuBenYiLiu-II prescription from the view of inducing cell autophagy. The results will also provide experimental evidence for the position and function of TCM in inducing cell autophagy.

祛邪和扶正是恶性肿瘤治疗的两大基本法则，固本抑瘤II号是肿瘤专家郁仁存教授等多年经验总结创制的祛邪、扶正并重的抗肿瘤系列方剂之一，作为院内制剂大量应用，收到了良好的临床疗效。我们的前期研究发现固本抑瘤II号对荷瘤鼠乳腺癌生长具有抑制作用，其含药血清能够在体外通过诱导自噬抑制肿瘤细胞增殖，且其祛邪、扶正不同组分在诱导细胞自噬和抗肿瘤作用方面存在差异。本课题拟进一步研究：1）固本抑瘤II号能否在体内通过干预mTOR通路及其调控分子诱导乳腺癌细胞发生自噬；2）祛邪药和扶正药组分在不同肿瘤负荷时期应用是否能通过对细胞自噬的差异性作用对肿瘤生长、转移产生不同影响，以期从抑瘤作用和诱导细胞自噬角度探讨中药抗肿瘤治疗中祛邪、扶正法的作用特点及其在肿瘤病程中的合理使用时机，并为中药在诱导自噬这一肿瘤研究新热点领域的地位和作用提供实验研究依据。

祛邪和扶正是恶性肿瘤治疗的两大基本法则，固本抑瘤II号是肿瘤专家郁仁存教授等多年经验总结创制的祛邪、扶正并重的抗肿瘤系列方剂之一，作为院内制剂大量应用，收到了良好的临床疗效。本课题研究内容主要为：1）固本抑瘤II号能否在体内通过干预mTOR通路诱导乳腺癌细胞发生自噬；2）祛邪药和扶正药组分在不同肿瘤负荷时期应用是否能通过对细胞自噬的差异性作用对肿瘤生长、转移产生不同影响。主要结果：1.摸索建立了生物发光4T1-luc2 乳腺癌细胞株接种于小鼠乳垫原位，接种后6周切除原发瘤，接种后8周小动物成像系统观察转移瘤的小鼠肿瘤生长、转移情况的非侵入性动态定量观察模型；2.在上述模型基础上，观察荷瘤对照组、全方组、祛邪组、扶正组、扶正→祛邪组、祛邪→扶正组各实验组小鼠原发瘤、转移瘤光子数，结果发现接种后42d，全方组原发瘤光子数明显低于荷瘤对照组，其他各组与对照组比较无差异，接种后56d，祛邪→扶正组原发瘤光子数明显低于荷瘤对照组，其他各组与对照组比较无差异。3. 接种后42d，各实验组肿瘤组织LC3表达无显著差异，且各组细胞凋亡少见。4. 接种后42d，祛邪→扶正组瘤组织AKT、p-AKT、p70S6K、p-p70S6K、p-mTOR蛋白表达较荷瘤对照组降低。5. 采用不同氧浓度培养环境模拟肿瘤细胞生长不同时期条件，采用中药含药血清进行体外干预，结果药物作用24、48h，在1.25%-7.5%终浓度范围内，各中药组细胞增殖抑制率随药物浓度升高而升高，7.5%扶正药、祛邪药组分、全方含药血清作用后细胞增殖抑制率分别为与同浓度鼠血清对照组比较均有显著性差异，药物作用24h，低氧环境中扶正组、祛邪组、Taxol药效较常氧环境减低，全方组药效维持较好。6.低氧环境中，各实验组AKT、p-AKT、P70s6K、p-P70s6K、mTOR、p-mTOR表达较常氧环境降低，但各环境组内，各实验组无显著差异。7.固本抑瘤II号有效抗肿瘤成分SSCE体外作用于4T1细胞，可见LC3转位，AKT、p-AKT、ERK、p-ERK、P70s6K、p-P70s6K、mTOR、p-mTOR表达显著低于对照组。研究结果说明，固本抑瘤II号全方抗肿瘤作用优于其单一组分，在肿瘤进展过程中采用先祛邪后扶正的治疗次序能够减少转移瘤的发生，各药物组诱导细胞自噬现象不显著，其治疗作用与调控AKT-mTOR途径有关。