基于自噬系统mTOR信号通路探讨扶正祛邪中药小复方干预阿尔茨海默病模型的机制研究

The activation of mammalian target of rapamycin(mTOR) signaling leading to obstacles of autophagy-lysosome pathway that is a key to induce acculation of Aβ and Tau protein of Alzheimer's disease(AD).The inhibiting activation of mTOR signaling can induce autophagy and improve cognitive.therefore,the study on autophagy of AD from mTOR signaling pathway could provide a new target and become a good Evaluation system of Traditional Chinese medicine curative effect to AD.The early prediction experiment results showed that the chinese herbal compound of Fuzheng Quxie can inhibt obviously the acculation of Aβ protein,based on which,this study would use APP/PS1 double transgenic mouse as AD model in vivo and APP/PS1 double transgenic cell as AD model in vitro to observe the effect of extracts from chinese herbal compound of Fuzheng Quxie on the mTOR signaling pathway of AD,and provide a new science basis for AD treatment with TCM methods.

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mammalian target of rapamycin，mTOR)信号激活导致自噬溶酶体途径障碍是毒性蛋白Aβ、Tau聚集从而引发阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）的关键环节，抑制mTOR信号通路过度激活可诱导自噬从而改善认知功能，因此，从mTOR信号通路诱导的细胞自噬来研究AD，无疑为研究中医药干预AD的作用机制提供了新的靶点和切入点，有可能成为干预AD中药疗效的良好评价体系。本研究在前期预实验结果发现扶正祛邪中药小复方对AD模型Aβ蛋白聚集具有明显抑制作用的基础上，以国内较先进的APP/PS1双转基因小鼠及人APP/PS1双基因转染细胞这两种体内外AD模型为实验平台，结合最新AD研究进展，从mTOR信号通路出发，在分子、细胞及整体水平探讨扶正祛邪中药复方干预AD的可能信号转导机制，为中医药防治AD的机理研究和推广应用提供科学依据。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mammalian target of rapamycin，mTOR)信号激活导致自噬溶酶体途径障碍是毒性蛋白Aβ、Tau聚集从而引发阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）的关键环节，抑制mTOR信号通路过度激活可诱导自噬从而改善认知功能，因此，从mTOR信号通路诱导的细胞自噬来研究AD，无疑为研究中医药干预AD的作用机制提供了新的靶点和切入点，有可能成为干预AD中药疗效的良好评价体系。本研究分为两部分：第一部分为整体动物实验，以3月龄APP/PS1双转基因小鼠作为AD研究载体，观察扶正祛邪方干预6个月后APP/PS1小鼠学习记忆能力，脑组织病理形态学，神经细胞超微结构，细胞自噬功能（PS-1、TLN端脑素、LC3、p62、Bcl-2、Beclin1）以及mTOR信号通路（mTOR、p-mTOR、p70S6K、4EBP1）的变化。第二部分为体外细胞实验，用脂质体法对HEK293细胞进行转染，获得稳定表达APP695和PSEN1 dE9基因的细胞株进行实验，观察转染前后细胞形态学的变化，并观察扶正祛邪方干预24h、48h后细胞形态学，细胞超微结构，细胞自噬功能（PS-1、TLN端脑素、LC3、p62、Bcl-2、Beclin1），mTOR信号通路（mTOR、p-mTOR、p70S6K、4EBP1）及细胞溶酶体功能（LAMP1、Cathepsin D、V-ATPase）的变化。研究结果显示，扶正祛邪方可通过降低mTOR、p-mTOR的表达，抑制mTOR信号通路的过度激活，从而调节自噬相关蛋白及基因LC3、P62、Beclin 1、PS1、TLN的表达，以及溶酶体相关蛋白Cathepsin D、V-ATPase表达，促进自噬体的形成和自噬溶酶体的降解，达到抑制阿尔茨海默病发生发展的作用。该研究为中医药防治AD的机理研究和推广应用提供科学依据。