基于益气活血解毒法的固本抑瘤Ⅱ号及拆方对乳腺癌MCF-7细胞PI3K自噬通路的干预作用及其与凋亡关系研究

虚、瘀、毒是乳腺癌的病机要点，益气活血解毒法是临床治疗乳腺癌的重要法则。基于益气活血解毒法的固本抑瘤II号是肿瘤专家郁仁存教授多年经验总结创制的院内制剂，具有良好的临床疗效，我们的前期研究发现其含药血清能在体外抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖，并诱导其发生自噬与凋亡，且该自噬与凋亡有相互促进的趋势。本课题拟进一步研究：1）固本抑瘤II号及拆方体内抑瘤效果与其诱导自噬和凋亡的相关性，2）该中药含药血清在体外对PI3K-Akt-mTOR、Beclin-1-PI3K-Ⅲ（hvps34）自噬通路及其调控因子的干预作用，3）分别观察药物对3-MA阻断自噬后细胞凋亡的影响及对Z-VAD-FMK阻断凋亡后自噬和溶酶体的影响，以期从诱导细胞自噬、自噬性死亡角度揭示益气活血解毒法抗肿瘤作用机制和组方配伍的科学原理，并为中药在自噬这一肿瘤研究热点领域的地位和作用提供实验研究依据。

中医学认为乳腺癌主要由于脏腑亏虚、痰瘀闭阻，毒邪郁滞所致。而中晚期肿瘤患者常存在气虚血瘀证，应以益气活血解毒法治疗。基于益气活血解毒法的固本抑瘤II号是首都医科大学附属北京中医医院肿瘤科治疗气虚血瘀证恶性肿瘤患者的临床有效方剂，常配合化疗使用。我们的前期研究发现其含药血清能在体外抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖，并诱导其发生自噬与凋亡，且该自噬与凋亡有相互促进的趋势。本项目进一步研究：1）固本抑瘤II号及拆方体内抑瘤效果与其诱导自噬和凋亡的相关性，2）该中药含药血清在体外对PI3K-Akt-mTOR、Beclin-1-PI3K-Ⅲ（hvps34）自噬通路及其调控因子的干预作用，3）分别观察药物对3-MA阻断自噬后细胞凋亡的影响及对Z-VAD-FMK阻断凋亡后自噬和溶酶体的影响，以期从诱导细胞自噬、自噬性死亡角度揭示益气活血解毒法抗肿瘤作用机制和组方配伍的科学原理，并为中药在自噬这一肿瘤研究热点领域的地位和作用提供实验研究依据。通过本项目研究，我们发现：固本抑瘤II号全方、活血、解毒组的10%、20%浓度含药血清能够抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖。一定浓度的固本抑瘤II号及各拆方组含药血清可诱导人乳腺癌MCF-7细胞产生自噬，该自噬通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路而诱导，自噬抑制剂3-MA能够抑制固本抑瘤II号全方和各拆方组所诱导的细胞自噬发生，阻断自噬后细胞凋亡减少。凋亡抑制剂Z-vad-fmk可以阻断部分药物引起的凋亡，阻断凋亡后细胞自噬同样减少，因此，推断SSCE抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖可能为自噬与凋亡相互促进，协同作用的结果。