对瑞氏木霉的基因定位置换整合构建木糖醇生产菌

采用双载体系统和PCR技术克隆了瑞氏木霉木糖醇脱氢酶cDNA基因和基因组基因，测定了基因的核苷酸序列；采用系列Northern杂交的方法对瑞氏木霉木糖代谢关键酶基因（木糖还原酶基因、木糖醇脱氢酶基因）以及PP途径转醛醇酶基因在20种不同碳源上的表达进行了研究；构建了多株不同基因型、能利用木糖、积累木糖醇的重组酿酒酵母菌；其中HMEX2转化木糖为木糖醇的效率可达094g/g；将木糖醇脱氢酶反义DNA插入瑞氏木霉CEH强启动子和终止子序列之间，构建了木糖醇脱氢酶反义RNA表达盒；将携带反义RNA的转化载体与潮霉素抗性质粒p3SR2一起，对瑞氏木霉RutC30原生质体进行共转化，筛选到能积累木糖醇的转化菌株AM10。该菌株木糖醇的积累量可达48g/l，比出发菌株提高6.7倍。