瑞氏木霉基因组水平农杆菌介导的T-DNA插入突变

建立有注释的单基因突变体库是功能基因组学研究的宝贵资源。针对目前只有少数真菌开展功能基因组分析的现状，急需发展大规模基因突变和功能分析技术。丝状真菌瑞氏木霉作为具有重要经济价值的工业生产菌株，开展功能基因组学研究是生物质资源转化实用化的迫切需求。本项目建立和优化瑞氏木霉农杆菌T-DNA介导的转化和随机整合诱变系统，在基因组范围进行T-DNA插入突变。构建绿色荧光蛋白和潮霉素磷酸转移酶双选择标记二元载体，建立高通量筛选技术平台；采用孢子高通量TAIL-PCR技术获取突变群体基因组T-DNA插入位点侧翼序列，进行生物信息学分析；采用反向遗传学方法研究突变群体，获得与突变性状相关的一批基因；选择基因功能改变影响细胞生长/发育、代谢或信号转导的突变株进行深入的分子遗传学研究。控制重要性状的基因功能的阐明有助于深入了解丝状真菌特有的生命现象，对优化瑞氏木霉产酶发酵以及指导菌株遗传改造都具有重要意义。