基于P38MAPK信号通路研究拔伸松动法治疗KOA的作用机制

Previous study showed that the pulling loose manipulation is an efficient method in the treatment of KOA as early, mid, and late, for the technique can reduce the concentration of IL-1β,TNF-α.The P38MAPK signalling pathway contributes to KOA,this object can regulate increase,apoptosis,differentiate of chondrocyte,and synthesis of extracellular matrix.Based on previous research we put forward the hypothesis that the pulling loose manipulation can bring down the P38MAPK signalling pathway, and then improve function of chondrocyte as each period, and restore the injured cartilaginous tissue.The research will expression the i NOS、COX-2,PGE2,MMP-1/13,P38MAPK and m RNA level in the articular cartilage and synovial fluid of intervention of pulling loose manipulation the KOA rabbit model as early, mid,and late.We will analysis data of disposed rabbit models of each group as early, mid, and late, verify the fact that therapy take effect by reduce correlation factors,reveal the treatment mechanism of pulling loose manipulation.Finally,the findings will provide provide scientific basis in clinical application of pulling loose manipulation.

前期研究发现拔伸松动法治疗膝骨性关节炎（KOA）早中期疗效确切，可降低模型兔关节液中IL-1β、TNF-α水平。P38MAPK信号通路可调控软骨细胞的增殖、凋亡、分化、细胞外基质合成，与KOA发生发展密切相关。基于前期研究基础，提出拔伸松动法可下调P38MAPK信号通路治疗KOA并明显改善KOA早中期软骨细胞功能、修复损伤软骨组织的假说。通过对兔KOA模型早中晚期进行拔伸松动法干预，分别应用免疫组化、Western blot和RT-PCR等方法检测关节软骨和关节液中i NOS、COX-2、PGE2、MMP-1/13、P38MAPK及m RNA的表达水平。研究拔伸松动法是否通过下调P38MAPK信号通路而影响相关因子表达，分析干预后兔KOA模型早中晚期和各组数据差异，阐明拔伸松动法治疗KOA的机理，揭示其对KOA早中晚期软骨损伤修复的作用机制，为临床推广应用拔伸松动法治疗KOA提供可靠依据。

膝关节骨性关节炎（KOA）是一种常见的骨关节退行性疾病，严重影响患者的生活质量和劳动能力。云南省由于区位和气候的原因，是KOA的高发地区，研究一种安全有效、易于推广的疗法符合云南省社会及经济发展的需要。研究选健康成年白兔90只，体重1.8 千克－2.5 千克，雌雄不限，重量分布均一。随机分为三组，每组10只：拔伸松动法组、模型组、空白组。以Videman T造模方法，管型石膏伸直位固定兔右后肢膝关节2、4、6 周，复制膝关节骨性关节炎早期、中期和晚期的模型。造模完成后三天，治疗组以拔伸松动法干预，治疗20 次后取标本，采用RT-PCR、Western Blot、IHC检测P38MAPK信号通路及相关因子的表达水平。经过治疗后早期治疗组关节软骨和模型组比较MMP1、MMP13、PTGER2、COX2、INOS、P38MAPK的mRNA表达、蛋白表达水平以及平均光密度值(IOD)略有降低，MMP13的mRNA表达水平和PTGER2蛋白表达水平有差异(P＜0.05)。中期治疗组关节软骨和模型组比较MMP1、MMP13、COX2、PTGER2、P38MAPK的蛋白表达水平以及平均光密度值(IOD)明显降低，MMP1、MMP13、PTGER2、P38MAPK的蛋白表达水平组间比较有显著差异(P＜0.05)。晚期治疗组关节软骨和模型组比较MMP1、MMP13、PTGER2、COX2、INOS、P38MAPK的mRNA表达、蛋白表达水平以及平均光密度值(IOD)显著降低，MMP1、MMP13、COX2、P38MAPK的mRNA表达、蛋白表达水平有显著差异(P＜0.05)，PTGER2和INOS蛋白表达水平无差异。本研究证实：拔伸松动法对早期兔KOA可抑制滑膜的炎症反应和Ⅱ型胶原的降解，影响兔KOA的发展；中期可减少细胞凋亡和炎症介质产生，进而抑制软骨细胞外基质降解和软骨破坏，有利于损伤软骨的修复；对晚期兔KOA软骨细胞外基质降解和软骨破坏有一定的抑制作用。拔伸松动法可通过下调兔KOA早中期P38MAPK信号通路的表达，影响MMP1、MMP13、INOS、COX2、PTGER2等相关因子的表达水平，可抑制兔KOA早中期滑膜的炎症反应和Ⅱ型胶原的降解，减少细胞凋亡和炎症介质产生，改善KOA软骨细胞功能，有利于损伤的软骨组织的修复。本研究对于中医推拿防治膝关节骨性关节炎具有重要意义。